益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病腎病大鼠腎組織Nephrin、Nestin、Desmin影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討中藥益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病腎病(DN）模型大鼠腎組織Nephrin、Nestin和Desmin的表達(dá)變化，觀察與蛋白尿減少、腎臟病理及生化指標(biāo)改善的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示該方治療 DN的有效機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法：體重200±20g的健康雄性SD大鼠60只，清潔級，置于相同環(huán)境（室溫22℃上下、相對濕度50％左右）動物房，適應(yīng)性豢養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為五組：正常對照組（N組），模型對照組

2、（M組），纈沙坦組（代文，V組），纈沙坦（代文）+中藥低劑量組（V+L組），纈沙坦（代文）+中藥高劑量組（V+H組），造模各組單次腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ,45mg/kg）；N組單次腹腔注射同等劑量的檸檬酸鈉緩沖液（即用即配）。予標(biāo)準(zhǔn)飲食，定時消毒籠具，更換墊料，查看基本狀況。規(guī)律豢養(yǎng)3天后，尾尖靜脈快速測血糖，連續(xù)3次（0h,1h,2h）,若血糖≥16.7mmol/L，尿糖強(qiáng)陽性（+++～++++），尿蛋白陽性，尿量>造模前150%

3、，則造模成功。成模后 N組和M組大鼠灌服生理鹽水1ml?100g-1?d-1，V組灌服纈沙坦（代文）1.67mg?200g-1?d-1，V+L組、V+H組分別灌服等量代文加成人用量6.25倍、12.5倍的益氣養(yǎng)陰活血方，持續(xù)6周。灌胃結(jié)束前一天，代謝籠收集所有大鼠（46只）24h尿液，測定24h尿量及尿蛋白；生化檢測肝功、腎功、血脂、血糖等；切除腎臟，稱左側(cè)腎重，計算肥大指數(shù)；HE、PAS染色，光鏡下觀察腎組織病理改變；圖像分析系統(tǒng)計算

4、腎小球體積；免疫組化法（IHC）檢測腎臟組織中Nestin和Desmin表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測腎臟組織中Nephrin表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠基本狀況
　　N組大鼠基本狀況良好，皮毛潤澤，雙目有神，活動自如，反應(yīng)靈敏，性情較溫順，食欲佳，飲水可，二便正常，體重自然增加；造模4組注射STZ后則表現(xiàn)為毛發(fā)稀疏、枯燥不順，精神差，活動減少，蜷縮抱團(tuán)，反應(yīng)遲緩，易激怒，警惕性增高，食欲亢進(jìn)，飲水量明顯增

5、加，稀軟便，小便量明顯增多，體重顯著下降；經(jīng)相應(yīng)藥物治療后，V組、V+L組、V+H組情況逐漸好轉(zhuǎn)，以V+H組最突出。
　　2、大鼠體重、腎重及肥大指數(shù)（腎重 g/體重Kg）
　　體重N組與造模4組差異顯著，腎重則無明顯差別；肥大指數(shù)M組、V組、V+L組、V+H組均明顯高于N組（P<0.01），V組、V+L組、V+H組皆顯著低于M組（P<0.01），V組與V+L組、V+H組之間存在顯著性差異（P<0.01），且V+H組明顯低于

6、V+L組，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　3、大鼠24h尿蛋白定量
　　24h尿蛋白定量N組與V+H組相比，無明顯差異（P>0.05），但明顯低于M組、V組、V+L組（P<0.01）；V組與V+L組差異無顯著性（P>0.05），但明顯高于V+H組（P<0.01）；V+H組低于V+L組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　4、大鼠的血生化指標(biāo)
　　ALT、BUN、Scr五組比較無顯著性差異。ALB比較：造模各

7、組（M組、V組、V+L組、V+H組）明顯低于N組（P<0.01）；V組與M組比較明顯提升（P<0.05），與V+L組、V+H組比較，有顯著性差異（P<0.01）；V+L組與V+H組比較差異無顯著性（P>0.05）。TC比較：N組與M組、V組、V+L組相比差異有顯著性（P<0.01），與V+H組有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；V組與M組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但與V+L組、V+H組差異具有顯著性（P<0.01）。TG比較：造模各組

8、與N組比較差異顯著（P<0.05）；V組與M組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但與V+L組、V+H組差異顯著（P<0.01）。FBG比較：N組明顯低于造模各組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；治療組（V組、V+L組、V+H組）與M組比較差異顯著（P<0.05）；V組與V+L組、V+H組相比有顯著性差異（P<0.01）；V+L組與V+H組無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　5、大鼠腎臟外觀及組織病理學(xué)變化
　　肉眼觀察：N

9、組大鼠雙腎形態(tài)大小正常，猶如蠶豆，暗紅色，表面光滑潤澤，未出現(xiàn)囊粘連，易剝離；M組大鼠腎臟體積明顯增大，且出現(xiàn)腫脹，質(zhì)地較硬，表面及皮質(zhì)呈灰白色，髓質(zhì)顏色加深，界線明朗。PAS染色后，光鏡下觀察：N組腎小球、腎小管、腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)均正常完整；M組腎小球彌漫球性或不規(guī)則增大，GBM增厚，MC增生增殖，ECM聚集，腎小管上皮細(xì)胞部分出現(xiàn)空泡變性及間質(zhì)纖維化；V組、V+L組、V+H組較M組病理改變均得到程度不一的減輕。
　　6、 Nesti

10、n、Desmin和Nephrin在五組大鼠腎組織中的表達(dá)情況
　　免疫組化（IHC）及酶聯(lián)免疫（ELISA）結(jié)果示：Nestin和Desmin擁有相同的表達(dá)部位，均在腎小球毛細(xì)血管基底膜外的足細(xì)胞胞漿，棕黃（褐）色物質(zhì)（絲狀或團(tuán)狀）預(yù)示著陽性表達(dá)；與N組比較，造模各組（M組、V組、V+L組、V+H組）Nephrin表達(dá)量明顯減少，Nestin和Desmin表達(dá)量明顯增加，具有顯著性差異；N組Nephrin表達(dá)量最多，M組Nesti

11、n、Desmin大量表達(dá)，與治療組（V組、V+L組、V+H組）對比有統(tǒng)計學(xué)意義；V組和V+L組、V+H組對比有顯著性差異；V+L組和V+H組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：1、益氣養(yǎng)陰活血方可以改善DN大鼠的基本狀況，減少蛋白尿，糾正低蛋白血癥，改善糖脂代謝紊亂；
　　2、益氣養(yǎng)陰活血方可以降低DN大鼠腎臟肥大指數(shù)，抑制腎小球系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生增殖，減輕GBM增厚及足細(xì)胞損傷，改善腎臟病理；
　　3、益氣養(yǎng)陰活血方可