益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠腎病的保護(hù)及腎組織內(nèi)皮素-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:糖尿病性腎病（diabetic nephropathy, DN）是糖尿病微血管并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎病的重要原因之一。因此，積極防治糖尿病腎病的早期病變意義重大。益氣養(yǎng)陰活血方為導(dǎo)師張庚良教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，起到了防治糖尿病腎病進(jìn)展及保護(hù)腎臟的作用。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射鏈脲佐菌素復(fù)制糖尿病大鼠模型，后給予藥物干預(yù)，觀察益氣養(yǎng)陰活血方對糖尿病大鼠的血糖、腎功能、血脂、血漿內(nèi)皮素-1、24小時(shí)尿微量白蛋白排泄率、尿內(nèi)皮素-1排泄

2、量、腎臟組織病理形態(tài)學(xué)、腎重/體重值以及腎臟組織中內(nèi)皮素-1表達(dá)的影響，初步研究本方對腎臟的保護(hù)作用。
　　方法:選用清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠，體重約230-250g，共60只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，正常對照組(N)隨機(jī)選出12只組成，其余48只大鼠用于復(fù)制糖尿病模型。按照55mg/kg體重計(jì)算，單次腹腔注射1％的鏈脲佐菌素枸櫞酸緩沖液（緩沖液濃度為0.1 mmol/L，pH為4.5），正常對照組給予相同體積的1％檸檬酸緩

3、沖液單次腹腔注射。72小時(shí)后，采大鼠尾靜脈血，測血糖值≥16.7mmol/L，并同時(shí)大鼠的飲水量及尿量明顯增多，確定造模成功。
　　將造模成功的48只大鼠隨機(jī)分為模型對照組(M)、中藥益氣養(yǎng)陰活血方組（簡稱中藥組，H）、西藥厄貝沙坦組（簡稱西藥組，W）、益氣養(yǎng)陰活血方聯(lián)合厄貝沙坦組（簡稱聯(lián)合組，H+W），每組為12只。造模成功一周后，各組給予藥劑量按照成人劑量的10倍灌胃。益氣養(yǎng)陰活血方組給予本方每日10ml/kg(相當(dāng)于生藥32

4、.5g/kg)體重灌胃，厄貝沙坦組給予厄貝沙坦片混懸液（阿拉伯樹膠制為混懸液），每日10ml/kg（相當(dāng)于原藥2.5mg/ml）體重灌胃，每日一次。聯(lián)合組每日上午給予同等劑量的中藥灌胃，每日下午給予同等劑量的厄貝沙坦灌胃。正常對照組和模型組給予每日同等體積的生理鹽水灌胃。用代謝籠收集24小時(shí)尿液，測24小時(shí)尿白蛋白排泄率和尿內(nèi)皮素-1的含量。給藥8周末，禁食不禁水12小時(shí)，2％的戊巴比妥鈉20mg/kg體重腹腔注射麻醉，取股動(dòng)脈血，檢測

5、各組大鼠血糖、腎功能、血脂、血漿內(nèi)皮素-1，取雙腎制作標(biāo)本，用于光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組化測定腎內(nèi)皮素-1的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況
　　正常對照組的大鼠飲食、飲水以及尿量均正常，體重有明顯增長，毛色光澤，精神狀態(tài)良好，活動(dòng)自如。模型組的大鼠均出現(xiàn)多飲、多食、多尿、消瘦、精神狀態(tài)不佳、毛色泛黃，活動(dòng)減少。一部分大鼠隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展，出現(xiàn)了一系列糖尿病并發(fā)癥，感染、四肢水腫等。三個(gè)治療組大鼠的

6、一般情況較模型組有一定的改善。模型組、厄貝沙坦組、益氣養(yǎng)陰活血方組、聯(lián)合組最終死亡大鼠數(shù)量分別為1只、1只、1只、1只，分析主要的死亡原因是灌胃不當(dāng)，或者是互相撕咬而致死亡。
　　2.血糖變化
　　模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠血糖均明顯高于正常組，有顯著性差異(P＜0.05);益氣養(yǎng)陰活血方組和聯(lián)合組有一定的降糖作用，與模型組比較血糖明顯下降，有顯著性差異(P＜0.05);厄貝沙坦組與模型組比較降糖效果無

7、顯著性差異(P＞0.05)。
　　3.血漿內(nèi)皮素-1及24小時(shí)尿內(nèi)皮素-1排泄量變化模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠血漿內(nèi)皮素-1均明顯高于正常組，有顯著性差異(P＜0.05);益氣養(yǎng)陰活血方組和聯(lián)合組可以降低血漿內(nèi)皮素-1的含量，與模型組比較內(nèi)皮素-1含量明顯下降，有顯著性差異（P＜0.05）;厄貝沙坦組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠24小時(shí)

8、尿內(nèi)皮素-1排泄量均明顯高于正常組，有顯著性差異（P＜0.05）;益氣養(yǎng)陰活血方組和聯(lián)合組可以降低24小時(shí)尿內(nèi)皮素-1的排泄量，與模型組比較內(nèi)皮素-1明顯下降，有顯著性差異(P＜0.05);厄貝沙坦組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　　4.腎臟肥大指數(shù)的變化模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠的腎臟肥大指數(shù)均高于正常組，有顯著性差異(P＜0.05);與模型組相比較，三個(gè)治療組的大鼠的腎臟肥大指數(shù)降低，有顯著

9、性差異(P＜0.05);與益氣養(yǎng)陰活血方組和厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組大鼠的腎臟肥大指數(shù)降低，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　5.腎功能變化及24小時(shí)尿白蛋白排泄率的變化模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠的尿素氮、肌酐明顯高于正常組，有顯著性差異(P＜0.05);與模型組比較，三個(gè)治療組的大鼠的尿素氮、肌酐均降低，有顯著性差異(P＜0.05);與益氣養(yǎng)陰活血方組和厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組大鼠的尿素氮、肌酐降低，有顯著性

10、差異(P＜0.05)。
　　模型組的24小時(shí)尿白蛋白排泄率，與正常對照組比較明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05);三個(gè)治療組的大鼠24小時(shí)尿蛋白排泄率與模型組比較，有顯著性差異(P＜0.05);與益氣養(yǎng)陰活血方組和厄貝沙坦組比較，聯(lián)合組大鼠的24小時(shí)尿蛋白排泄率降低，有顯著性差異(P＜0.05)。
　　6.血脂變化
　　與正常對照組比較，模型組、益氣養(yǎng)陰活血方組、厄貝沙坦組、聯(lián)合組大鼠的血脂明顯升高，有顯著性差異(P

11、＜0.05);益氣養(yǎng)陰活血方組與聯(lián)合組有一定的降脂作用，與模型組比較，有顯著性差異(P＜0.05);而厄貝沙坦組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　7.腎臟組織病理形態(tài)學(xué)的影響正常對照組腎小球結(jié)構(gòu)清晰完整，未見腎小球體積增大，未見腎小球毛細(xì)血管基底膜、系膜、基質(zhì)異常改變;模型組腎組織結(jié)構(gòu)紊亂，細(xì)胞核增多，腎小球體積明顯增大，系膜區(qū)增寬。三個(gè)治療組與模型組比較，有不同程度的減輕，以聯(lián)合組最為明顯。
　　8.腎臟內(nèi)皮

12、素-1表達(dá)的影響ET-1抗原免疫組化學(xué)染色顯示棕黃色，正常組腎組織腎小球及腎小管上皮細(xì)胞有很弱的表達(dá)。模型組腎組織腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的ET-1顯示強(qiáng)陽性表達(dá)，明顯高于正常組。三個(gè)治療組與模型組比較，表達(dá)有不程度的下降(P＜0.05)，尤其是聯(lián)合組與單一藥組比較，下降更為明顯。
　　結(jié)論:
　　1.益氣養(yǎng)陰活血方可以降低糖尿病大鼠尿微量白蛋白的排泄，同時(shí)降低尿素氮、肌酐值，延緩大鼠糖尿病腎病的進(jìn)程，從而起到保護(hù)腎臟