江蘺中類菌孢素近氨基酸(MAAs)分離純化及應(yīng)用研究.pdf

1、類菌孢素氨基酸(mycosporine-like amino acids，MAAs)是廣泛存在于海洋生物尤其是藻類植物中的特異化合物，具有較強(qiáng)的紫外吸收特性。目前，學(xué)者們發(fā)現(xiàn)在北美洲、澳大利亞、歐洲沿海海域生存的多種藻類均含有種類豐富的MAAs物質(zhì)。中國(guó)海岸線較長(zhǎng)，沿海海域海藻種類也較為豐富，但對(duì)于藻類中的MAAs研究則較少，尤其是已經(jīng)實(shí)現(xiàn)人工養(yǎng)殖的江蘺、紫菜、裙帶菜等大型藻類均亟待研究，以提高其應(yīng)用價(jià)值。本文以湛江產(chǎn)江蘺為原料，對(duì)其含

2、有的MAAs物質(zhì)的主要成分進(jìn)行了鑒定，通過(guò)正交旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)得到了江蘺中MAAs粗提物的最優(yōu)提取工藝，比較了幾種離子交換樹(shù)脂對(duì)MAAs提取物的純化效果，確定了最佳純化條件，并初步研究了MAAs提取物在防曬霜中的應(yīng)用并驗(yàn)證了Porphyra-334純化物對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞安全性。
　　 1.對(duì)湛江人工養(yǎng)殖江蘺進(jìn)行了紫外線吸收物質(zhì)-MAAs(Mycosporine-likeamino acids)的提取鑒定，并對(duì)主要成分及其含

3、量進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)湛江產(chǎn)江蘺(Gracilaria changii)MAAs提取物中主要含有以下四種MAA成分：Palythine、Shinorine、Palythinol和Porphyra-334，其中Porphyra-334和Palythine含量較高。應(yīng)用高效液相色譜法(HPLC)和紫外分光光度法(UV)對(duì)Porphyra-334成分進(jìn)行測(cè)定，在此基礎(chǔ)上，通過(guò)數(shù)據(jù)處理分析，建立了一種快速、有效和準(zhǔn)確的MAA類紫外吸收物質(zhì)檢測(cè)方

4、法。
　　 2.以江蘺中幾種MAA類物質(zhì)的得率為考察指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，建立了甲醇溶液浸提MAAs的二次回歸模型，以MAA類物質(zhì)的得率為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面分析，確立醇提MAAs的優(yōu)化工藝條件為：提取溫度48.12℃，液固比34:1，甲醇濃度25％，浸提時(shí)間1.85h，優(yōu)化條件下預(yù)測(cè)提取率為4.943mg/g：試驗(yàn)值為4.893mg/g。
　　 3.比較了D152、D61、001×7、D

5、001、SA-2幾種離子交換樹(shù)脂對(duì)MAAs提取液分離純化的效果。通過(guò)靜態(tài)吸附試驗(yàn)篩選出吸附量和解析率最高的樹(shù)脂SA-2，在pH=3左右，其對(duì)粗提物的最大吸附量可達(dá)10.01mg/g，堿性條件下洗脫率最高；利用Freundlich等溫線模擬ln(qe)=bln(Co)+a(其中qe為平衡時(shí)的吸附量，Co為提取液中MAAs的初始濃度)，得a=1.16，b=1.12。比較試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果得到最適上樣濃度為3～5mg/mL，通過(guò)離子交換樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附

6、和解析試驗(yàn)確定利用SA-2樹(shù)脂動(dòng)態(tài)純化MAAs的工藝參數(shù)為：粗提物母液用超純水稀釋到4mg/mL，保持粗提液pH值3左右時(shí)上柱；上柱流速為2BV/h，上柱后吸附4小時(shí)，洗脫液為濃度2％的氨水，收集洗脫液冷凍干燥后進(jìn)行HPLC檢測(cè)，MAAs化合物純度為46.2％，樣品得率為89％，與純化前粗提物的純度(17.6％)相比提高了兩倍左右，該方法純化效果較好。
　　 4.將純化后的紫外吸收物質(zhì)MAAs添加到化妝品配方中制成防曬膏，并進(jìn)行