蓮子心中總黃酮、多糖的分離純化及氨基酸、農(nóng)殘測(cè)定研究.pdf

1、蓮子心(Plumula Nelumubinis)為睡蓮科植物蓮(Nelumbo nuciferaGaertn.)的成熟種子的干燥幼葉及胚根，含有生物堿，黃酮，多糖，氨基酸等主要成分。目前對(duì)蓮子心中生物堿的研究較為多見，對(duì)其中所含的黃酮，多糖，氨基酸類物質(zhì)研究較少。為了提高蓮子心藥材的利用率，本論文擬對(duì)蓮子心中總黃酮、多糖類物質(zhì)的分離純化及氨基酸、農(nóng)殘測(cè)定進(jìn)行研究，主要內(nèi)容如下:
　　1.蓮子心總黃酮回流提取工藝優(yōu)選
　　以總

2、黃酮提取量及浸膏得率為指標(biāo)，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察乙醇濃度、提取時(shí)間、料液比對(duì)提取效果的影響。最佳提取工藝為:采用20倍量70％乙醇提取2次，第一次1.5 h，第二次1h。
　　2.蓮子心總黃酮純化工藝優(yōu)選
　　以樹脂對(duì)蓮子心總黃酮的吸附量和解吸率為指標(biāo)，首先考察了ME-2、OU-2、DM130等10種樹脂;然后采用靜態(tài)與動(dòng)態(tài)相結(jié)合的方法，確定了DM130樹脂最佳純化蓮子心總黃酮的工藝參數(shù)。即，樣液質(zhì)量濃度

3、是0.4g·mL-1，溶液pH3～4;解吸劑為70％的乙醇，洗脫體積為上樣液3BV;洗脫流速為1mL·min-1。采用該工藝純化后，能得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞42％蓮子心總黃酮。
　　3.蓮子心中多糖的測(cè)定和純化
　　首先，依次采用水提取，木瓜蛋白酶除蛋白、濃縮、醇沉、真空干燥獲得蓮子心粗多糖。然后，利用DEAE-32纖維素和SephadexG-100進(jìn)行分離，先后用蒸餾水、不同濃度的NaCl洗脫作洗脫曲線，合并對(duì)稱峰得到7個(gè)多糖。<

4、br>　　4.蓮子心中氨基酸含量測(cè)定的研究
　　建立氣質(zhì)聯(lián)用法分析蓮子心中的氨基酸的方法。蓮子心采用水(1∶35)、6mol·L-1鹽酸(1∶25)高溫回流提取，提取液經(jīng)BSTFA+1％TMCS衍生后進(jìn)樣，采用全掃描(Scan)定性，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)內(nèi)標(biāo)法定量。色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25μm×0.25 mm)，初始柱溫為100℃，保持3min，程序升溫8℃·min-1至300℃，保持6min，分流比

5、為10∶1。結(jié)果:測(cè)得水解氨基酸15種，游離氨基酸13種，總含量分別為7.14％和0.13％。樣品的平均回收率(n=5)在85.7％～109.2％之間;RSD在0.77％～4.85％之間。該方法處理過程簡(jiǎn)單、簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確快速。
　　5.蓮子心中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的GC-MS分析
　　樣品經(jīng)C18凈化和硫酸磺化處理后用GC-MS分析。采用選擇離子監(jiān)測(cè)模式(selected ion monitoring，SIM)，以保留時(shí)間和特征

6、離子定性、外標(biāo)法定量。色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25μm×0.25 mm)，程序升溫（初始柱溫為80℃，保持1min，程序升溫30℃·min-1至175℃，保持4min，6℃·min-1至200℃，保持5 min，30℃·min-1至300℃），分流比為1∶1。
　　結(jié)果:23種農(nóng)藥在相應(yīng)范圍內(nèi)線性良好（r均在0.999以上），平均回收率(n=5)在87.9％～105.3％之間;RSD均在6％以下。采用該法對(duì)