中國(guó)荷斯坦牛kappa-酪蛋白基因多態(tài)性與泌乳性狀關(guān)聯(lián)性分析.pdf

1、K—酪蛋白(以下簡(jiǎn)稱K—CN)通常是牛乳腺分泌的一種含有少量磷酸基的磷蛋白。它是牛乳中酪蛋白的組成之一，是凝乳酶的天然底物。在自然狀態(tài)下，K—CN是使牛奶保持穩(wěn)定的乳濁液狀態(tài)的重要因子。 本文以600頭中國(guó)荷斯坦奶牛為研究材料，以K—CN基因?yàn)楫a(chǎn)奶性狀的候選基因，采用DNA測(cè)序、PCR—RFLP和CRS—PCR技術(shù)，主要研究了K—CN基因外顯子4、外顯子5和內(nèi)含子4區(qū)基因序列的單核苷酸多態(tài)性與中國(guó)荷斯坦牛泌乳性狀的關(guān)聯(lián)性，以及第

2、四和五外顯子不同單倍型組合對(duì)泌乳性狀的影響，為未來培育高乳蛋白及高乳脂率奶牛提供參考依據(jù)。研究結(jié)果如下： 1.K—CN基因Exon4多態(tài)性與泌乳性狀關(guān)聯(lián)性分析 在exon4的第10891 bp、10927 bp、10988 bp和10996 bp處分別發(fā)生了T/C錯(cuò)義突變(導(dǎo)致136位異亮氨酸到蘇氨酸的改變)、C/A錯(cuò)義突變(導(dǎo)致148位丙氨酸到天冬氨酸的改變)、G/A同義突變和T/A置換突變。據(jù)此分別選擇了TaqI、H

3、indIII、PstI、SspI4種限制性內(nèi)切酶檢測(cè)其多態(tài)性。4個(gè)位點(diǎn)的酶切多態(tài)性在所研究群體中是緊密連鎖的；4個(gè)位點(diǎn)的A、B等位基因在群體中都有分布，且處于低度多態(tài)；A和B等位基因的頻率分別為86.03％和13.97％； AA，AB和BB基因型頻率分別為73.71％，24.63％和1.66％；X2適合性檢驗(yàn)表明，該群體在這4個(gè)位點(diǎn)的突變達(dá)到Hardy—Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05)；BB和AB基因型個(gè)體乳脂率顯著高于AA基因

4、型個(gè)體(P＜0.05)，AB基因型個(gè)體脂蛋白比顯著高于AA基因型個(gè)體(P＜0.05)，但不同基因型對(duì)產(chǎn)奶量和乳蛋白率沒有顯著影響。 2.K—CN基因Exon5多態(tài)性和第四、五外顯子單倍型組合與泌乳性狀關(guān)聯(lián)性分析 在exon5上發(fā)現(xiàn)5個(gè)新的SNPs，包括A12907G、G12950A、C12989T、A13028G、T12980C，首次證實(shí)前4個(gè)位點(diǎn)緊密連鎖。單位點(diǎn)基因型與泌乳性狀的關(guān)聯(lián)分析表明：T12980C突變位點(diǎn)的T

5、C和CC基因型個(gè)體乳脂率、乳蛋白率分別極顯著(P＜0.01)、顯著高于TT基因型個(gè)體(P＜0.05)；緊密連鎖的4個(gè)突變位點(diǎn)的DE基因型個(gè)體乳脂率極顯著高于DD基因型個(gè)體(P＜0.01)。第四、五外顯子9個(gè)多態(tài)位點(diǎn)單倍型組合分析表明：共構(gòu)建出7種單倍型，發(fā)現(xiàn)了16種單倍型組合；其中H6H6單倍型組合個(gè)體乳脂率最高，H1H4次之；H1H4單倍型組合個(gè)體乳蛋白率最高；H5H6單倍型組合個(gè)體乳蛋白率及乳脂率最低。 3.K—CN基因In