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文檔簡介
1、目的:順鉑(順氯氨鉑Ⅱ,amminedichloroplatinumⅡ,CDDP)是目前一線化療藥物中最有效的藥物之一,廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤,尤其是宮頸癌(CervicalCancer,CC)的治療。但我們發(fā)現(xiàn)在治療過程中癌細(xì)胞會逐漸對順鉑產(chǎn)生不同程度的耐藥,后期的化療效果差強(qiáng)人意。本研究的目的是分析探討宮頸癌細(xì)胞對抗順鉑的相關(guān)機(jī)制,通過分析細(xì)胞周期蛋白Ⅰ(CyclinⅠ)的下游蛋白及其本身表達(dá)改變后,宮頸癌細(xì)胞耐藥程度的改變,探討細(xì)
2、胞周期蛋白Ⅰ在順鉑耐藥具體過程中發(fā)揮的作用,為下一步探討抑制宮頸癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性打下一定基礎(chǔ)。
方法:本研究按照年齡和臨床分期、病理分期,選取了30例宮頸癌病人的腫瘤組織標(biāo)本入組。采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)分析腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白Ⅰ的表達(dá),應(yīng)用蛋白印跡試驗(yàn)(Western Blot,WB)檢測下游蛋白質(zhì)分子的表達(dá)變化。應(yīng)用細(xì)胞增殖試驗(yàn)及異種移植試驗(yàn)檢測順鉑對宮頸癌細(xì)胞的毒性變化。慢病毒介導(dǎo)的基因高表達(dá)和s
3、iRNA介導(dǎo)的基因水平下調(diào)被用來觀察細(xì)胞周期蛋白Ⅰ在宮頸癌耐藥過程中的作用。
結(jié)果:腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白Ⅰ的濃度與順鉑耐藥正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),化療期間對順鉑產(chǎn)生耐藥的宮頸癌病人中,細(xì)胞周期蛋白Ⅰ存在高表達(dá)。穩(wěn)定高表達(dá)的細(xì)胞周期蛋白Ⅰ使HeLa細(xì)胞對更高濃度的順鉑也產(chǎn)生了抵抗。同時(shí),體外實(shí)驗(yàn)證明上調(diào)細(xì)胞周期蛋白Ⅰ水平能夠明顯增加體外腫瘤細(xì)胞生長速率,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明上調(diào)細(xì)胞周期蛋白Ⅰ水平能夠增加體內(nèi)腫瘤細(xì)胞對順鉑的耐藥性。
4、> 通過對CyclinⅠ下游分子的檢測發(fā)現(xiàn),細(xì)胞周期蛋白Ⅰ促進(jìn)了細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶5(Cdk-5)的高表達(dá),而Cdk-5通過阻止宮頸癌細(xì)胞系的凋亡達(dá)到促進(jìn)順鉑耐藥的作用。與此相一致,在細(xì)胞周期蛋白Ⅰ高表達(dá)的Hella細(xì)胞系中,通過siRNA(Small interfering RNA)的作用減少Cdk5蛋白表達(dá),可以增加腫瘤細(xì)胞對順鉑的敏感性。
結(jié)論:細(xì)胞周期蛋白Ⅰ及其下游蛋白質(zhì)Cdk5與宮頸癌細(xì)胞對順鉑的耐藥性有關(guān)
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