奧曲肽逆轉(zhuǎn)人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞耐藥性及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、第一部分、奧曲肽抑制SKOV3／DDP細(xì)胞及裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:體外環(huán)境下研究生長(zhǎng)抑素類似物(somatostatin analogue,SSTA)奧曲肽(octreotide,OCT)對(duì)人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞SKOV3／DDP的生長(zhǎng)抑制作用,及對(duì)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響,同時(shí)接種SKOV3／DDP細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,觀察奧曲肽對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響。
　　 方法:1)OCT以0、1.25、2.5、5、10、2

2、0μg／ml6種不同濃度分別加入SKOV3／DDP細(xì)胞培養(yǎng)液中,用MTT比色法分析其對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響；OCT以上述6個(gè)濃度分別與濃度為0、1、2、4、8μg／ml的DDP聯(lián)合,加入SKOV3／DDP細(xì)胞培養(yǎng)液中,用MTT比色法分析兩藥的協(xié)同作用及OCT對(duì)DDP IC50的影響。2)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)OCT(10.0ug／ml)聯(lián)合DDP(2.0ug／ml)對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。3)接種人耐順鉑卵巢癌細(xì)胞SK

3、OV3／DDP裸鼠移植瘤模型:細(xì)胞懸液接種于20只6-8周的雌性BALB／c-nu／nu裸鼠右腋窩皮下,于接種后2周將裸鼠隨機(jī)分成4組:對(duì)照組、順鉑組、奧曲肽、奧曲肽和順鉑聯(lián)合治療組(聯(lián)合治療組),每組各5只。對(duì)照組予生理鹽水5ml／kg,s.c.,qd；順鉑劑量為4mg／kg,i.p.,qw；奧曲肽劑量為100ug／kg,s.c.,qd,連續(xù)用藥4周。末次用藥24小時(shí)后處死動(dòng)物,檢測(cè)腫瘤體積、重量,并比較抑瘤率。
　　 結(jié)果:

4、1)奧曲肽對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞增殖的影響:奧曲肽在1.25μg／ml濃度時(shí)即對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞有增殖抑制作用,抑制作用隨濃度的增加呈增強(qiáng)趨勢(shì),在濃度≥5μg／ml時(shí),作用時(shí)間在0-96h內(nèi),出現(xiàn)明顯的時(shí)間依賴性(P<0.05)。2)奧曲肽與順鉑的聯(lián)合作用及奧曲肽對(duì)順鉑IC50值的影響:奧曲肽可以降低順鉑的IC50,其降低作用有明顯的劑量依賴性。低劑量組(奧曲肽1.25ug／ml)對(duì)順鉑的IC50影響不明顯(P>0.05),中高

5、劑量組(奧曲肽2.5-20ug／ml)降低順鉑的IC50作用顯著(P<0.05)。當(dāng)順鉑濃度≥2ug／ml,奧曲肽濃度≥5ug／ml時(shí)兩藥聯(lián)用具有協(xié)同作用。3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)順鉑、奧曲肽單藥及聯(lián)合對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響:結(jié)果顯示奧曲肽具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,聯(lián)合組誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用明顯高于二者單獨(dú)作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。奧曲肽處理后與對(duì)照組相比,G0／G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增

6、多。4)奧曲肽對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響:奧曲肽組、順鉑組、聯(lián)合治療組、對(duì)照組平均瘤體體積(cm3)分別為:0.25±0.03、0.39±0.02、0.09±0.01、0.51±0.03；平均瘤體重量(g)分別為:0.22±0.004、0.37±0.01、0.07±0.01、0.55±0.02；抑瘤率奧曲肽組、順鉑組、聯(lián)合治療組分別為:52.25％、24.6％、82.24％；各組間比較,p<0.05,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論

7、:1)奧曲肽可抑制SKOV3／DDP細(xì)胞的增殖,作用呈時(shí)間劑量依賴性。奧曲肽可顯著降低順鉑的IC50,與奧曲肽濃度呈線性負(fù)相關(guān),兩藥聯(lián)用有協(xié)同作用。奧曲肽與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SKOV3／DDP裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng),優(yōu)于單獨(dú)用藥。2)體外環(huán)境下,奧曲肽具有促進(jìn)SKOV3／DDP細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期阻滯作用,與順鉑聯(lián)用促凋亡及細(xì)胞周期阻滯作用得到加強(qiáng)。
　　 第二部分、奧曲肽對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞株耐藥基因表達(dá)的影響
　　

8、 目的:在奧曲肽抑制SKOV3／DDP細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)上,研究奧曲肽在體內(nèi)外環(huán)境下對(duì)SKOV3／DDP細(xì)胞MDR1、MRP2、EGFR、GST-π、SSTR2 mRNA表達(dá)的影響,探討奧曲肽體內(nèi)外增加順鉑敏感性,逆轉(zhuǎn)SKOV3／DDP細(xì)胞耐藥性的可能機(jī)制。
　　 方法:1)根據(jù)MTT結(jié)果選取中低毒劑量的OCT,濃度分別為2.5、5、10ug／ml,加入SKOV3／DDP細(xì)胞培養(yǎng)液中,作用48小時(shí)后收集細(xì)胞,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(

9、Real timePCR)檢測(cè)不同濃度OCT作用后SKOV3／DDP細(xì)胞SSTR2、MDR1、MRP2、GST-π、EGFRmRNA表達(dá)的變化。2)在體內(nèi)研究的基礎(chǔ)上,接種裸鼠移植瘤模型,按第一部分實(shí)驗(yàn)分組并且藥物干預(yù)處理后,采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)SKOV3／DDP裸鼠移植瘤組織中SSTR2、MDR1、MRP2、GST-π、EGFR mRNA表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1)在體外環(huán)境下,奧曲肽作用后,SKOV3／DDP細(xì)胞各組間均檢

10、測(cè)到有SSTR2mRNA表達(dá),但各組間無明顯差異(P>0.05)；EGFRmRNA、MRP2mRNA有不同程度的下降,且呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MDR1mRNA各濃度組間及與對(duì)照組相比,表達(dá)無明顯差異(P>0.05)；GST-π mRNA與對(duì)照組相比有增高趨勢(shì)(P<0.05),但各濃度組間表達(dá)無明顯差異。2)在體內(nèi)環(huán)境下,移植瘤細(xì)胞檢測(cè)到有SSTR2mRNA表達(dá),且經(jīng)奧曲肽處理后的兩組SSTR2m

11、RNA表達(dá)有上調(diào)趨勢(shì)(P<0.05)；經(jīng)藥物干預(yù)后,各組MDR1mRNA的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)；與對(duì)照組相比各組EGFR、MRP2 mRNA的表達(dá)量明顯減少(P<0.05),且奧曲肽組與聯(lián)合組比順鉑組表達(dá)量下降更明顯(P<0.05),聯(lián)合組比奧曲肽組EGFRmRNA的表達(dá)量更少(P<0.05)；與對(duì)照組相比,各組GST-π mRNA的表達(dá)量明顯減少(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1)體外環(huán)境下,奧曲肽可顯