阿帕替尼對(duì)卡維地洛體內(nèi)外代謝影響研究.pdf

1、目的：
　　建立同時(shí)檢測(cè)微粒體和血漿中卡維地洛及其三個(gè)主要代謝產(chǎn)物4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的超高液相色譜-質(zhì)譜(UPLC-MS)的方法，研究阿帕替尼對(duì)卡維地洛體內(nèi)外代謝的影響。
　　方法：
　?、偃烁?、鼠肝微粒體和大鼠血漿樣品用乙腈沉淀后檢測(cè)。采用Acquity U-HPLCBEH C18柱為分離柱，流動(dòng)相采用乙腈-0.1％甲酸體系，梯度洗脫;采用AB SciexQTRAP5500三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（電噴霧

2、離子源）進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，CAR及其三個(gè)主要代謝產(chǎn)物4'-HPC、5'-HPC、o-DMC和內(nèi)標(biāo)美托洛爾采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)的方法檢測(cè)，五個(gè)物質(zhì)的MRM分別是m/z406.94→99.87、m/z423.10→99.93、m/z423.03→99.93、 m/z393.03→209.88、m/z268.10→116.00。
　?、谥苽淙烁?、鼠肝微粒體，進(jìn)行體外微粒體孵育實(shí)驗(yàn)。200μL體系中含有肝微粒體（大鼠肝微粒體0.44 mg

3、·mL-1、人肝微粒體0.44 mg·mL-1）、0.1M Tris-HCl、抑制劑、2.5μM卡維地洛和1 mmol·L-1 NADPH。不同濃度的阿帕替尼加入到上述體系中，以計(jì)算半數(shù)最大抑制濃度(IC50)。加入不同濃度的卡維地洛，使卡維地洛的終濃度依次為0.01、0.1、1、5、10、25、50、100μM，計(jì)算Km值。
　?、坌坌許D大鼠15只，隨機(jī)分為3組（A組、B組和C組），每組5只。A組口服給予50 mg/kg阿帕替

4、尼，一天一次，共計(jì)一周;B組用0.3％ CMC代替，共計(jì)6天，第七天給予50 mg/kg阿帕替尼;C組為對(duì)照組。在實(shí)驗(yàn)的第七天，A組動(dòng)物在給予阿帕替尼0.5 h后灌胃給予12 mg/kg卡維地洛，C組動(dòng)物直接灌胃給予12 mg/kg卡維地洛。A組、B組、C組在給予卡維地洛后不同時(shí)間點(diǎn)尾靜脈取血。用建立的方法同時(shí)測(cè)定血漿中CAR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的濃度。用DAS程序計(jì)算主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：
　

5、?、貱AR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的保留時(shí)間分別為3.24、1.92、2.05和2.61min。血漿CAR、4'-HPC、5'-HPC和o-DMC分別在0.5～100 ng/mL、0.05～10 ng/mL、0.05～10 ng/mL、0.05～10 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。低、中、高3個(gè)濃度（CAR1、10、100 ng/mL、4'-HPC0.1、1、10 ng/mL、5'-HPC0.1、1、10 ng/mL、

6、o-DMC0.1、1、10 ng/mL)的日內(nèi)RSD和日間RSD均小于15％，回收率大于90％;血漿樣品在室溫放置24 h、凍融三次、冰凍保存30天條件下均有良好的穩(wěn)定性。
　?、?00μM的阿帕替尼可以明顯抑制人肝微粒體和大鼠肝微粒體中卡維地洛代謝物的形成，但在大鼠肝微粒體的抑制率明顯大于人肝微粒體。阿帕替尼對(duì)人肝微粒體中4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的最大半數(shù)抑制濃度IC50分別是2.04μM、1.78μM和3.50μ

7、M，阿帕替尼對(duì)大鼠肝微粒體中4'-HPC、5'-HPC和o-DMC的最大半數(shù)抑制濃度IC50分別是8.42μM、3.11μM和6.64μM。
　?、郯⑴撂婺岷涂ňS地洛合用后，A組、B組卡維地洛的Cmax分別增加51.37％和68.67％;4'-HPC的Cmax分別降低79.86％和66.33％;5'-HPC的Cmax分別降低84.02％和69.16％。其他藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)也相應(yīng)的增加或降低。
　　結(jié)論：
　　本研究建立的