阿帕替尼聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌的體內(nèi)實驗研究.pdf

1、目的：①靶向新藥阿帕替尼(Apatinib，YN968D1)是否對 CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗腫瘤的作用；②阿帕替尼與化療藥物順鉑(cisplatin，DDP)聯(lián)合使用治療CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型是否具有協(xié)同作用，并探討阿帕替尼與順鉑聯(lián)合使用的最佳給藥順序從而產(chǎn)生最大的療效。 方法：132只裸鼠建立CNE-2鼻咽癌移植瘤模型后，隨機分為A部分：分6組，每組18只，分為空白對照組（NS0.1ml/d ip d1-7

2、）、單獨阿帕替尼組(Apatinib200mg/kg/d ip d1-7)、單獨順鉑組(DDP5mg/kg/d ig d1)、先阿帕替尼后順鉑組(Apatinib200mg/kg/d ip d1-7+DDP5mg/kg/d ig d8)、先順鉑后阿帕替尼組(DDP5mg/kg/d ig d1+Apatinib200mg/kg/d ip d2-8)、同時用藥組(DDP5mg/kg/d ig d1+Apatinib200mg/kg/d ip

3、 d1-7)。治療結(jié)束后第二天，采用頸椎脫臼法每組處死6只裸鼠，瘤體稱重，比較抑瘤率，并計算兩藥聯(lián)合效應Q值，瘤體行免疫組化VEGFR-2抗體染色腫瘤組織檢測檢測腫瘤細胞 VEGFR2（血管內(nèi)皮生長因子受體2）的表達量，免疫組化CD31抗體染色腫瘤組織檢測腫瘤血管密度，行tunel檢測測腫瘤組織細胞凋亡的數(shù)量。每組另取6只裸鼠行小動物18F-FDG PET-CT檢測通過觀察圖像及T/M值檢測腫瘤組織代謝情況。每組剩余6只裸鼠觀察生存期，

4、并繪制腫瘤生長曲線圖。B部分共24只荷瘤裸鼠，隨機分為4組，每組6只，分為D0組（不治療組）、D5組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-4，第5天處死裸鼠）、D10組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-7，第10天處死裸鼠）、D15組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-7，第15天處死裸鼠），處死裸鼠剝離腫瘤后，瘤體行免疫組化 VEGFR-2抗體染色腫瘤組織檢測檢測腫瘤細胞VEGFR2（血

5、管內(nèi)皮生長因子受體2）的表達量，從而動態(tài)觀察在治療過程中及治療后腫瘤細胞的 VEGFR-2的表達量的變化。
　　結(jié)果：A部分荷瘤裸鼠空白對照組腫瘤生長最快，各治療組的腫瘤體積及質(zhì)量的平均值較空白對照組低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組的腫瘤體積及質(zhì)量最低，差異較其他各治療組具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。各治療組裸鼠的抑瘤率分別為：單獨阿帕替尼組15％，單獨順鉑組31%，先阿帕替尼組46%，

6、先順鉑組53%，阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組70%。阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組兩藥聯(lián)合效應Q值為1.69，說明兩藥連用產(chǎn)生協(xié)同作用。而先阿帕替尼組及先順鉑組兩組的Q值均小于1.5，說明兩藥連用僅產(chǎn)生了疊加作用。單用阿帕替尼組的裸鼠平均生存時間為60天，明顯高于空白對照組（41天），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。單獨順鉑組的平均生存時間為67天，較單獨順鉑組差異沒有統(tǒng)計學意義。所有聯(lián)合用藥組中其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組裸鼠平均生

7、存時間最長，達88天，較其他各組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。行免疫組化檢測示使用阿帕替尼治療后的裸鼠 VEGFR-2的表達、血管密度均明顯低于空白對照組及單用順鉑組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時給藥組VEGFR2的表達量及血管密度均最低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。行 TUNEL檢測腫瘤組織細胞凋亡可見空白對照組細胞凋亡數(shù)量很少，平均每個視野的凋亡細胞數(shù)約為3個左右。而單獨阿帕替尼組的

8、凋亡數(shù)量約為12個左右，單獨順鉑組的細胞凋亡數(shù)量約為15個左右，兩者之間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但這兩組的細胞凋亡數(shù)量較空白對照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。三組聯(lián)合用藥組的細胞凋亡數(shù)量明顯高于空白對照組及單獨用藥組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），在這三組當中，又以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥的細胞凋亡數(shù)量最高，達34.67個，較先阿帕替尼組及先順鉑組差異具有統(tǒng)計學意義。行小動物18F-FDG PET-C

9、T檢測檢測腫瘤組織代謝情況發(fā)現(xiàn)空白對照組的腫瘤最大，腫瘤代謝最強，整個腫瘤幾乎均呈高代謝信號， T/M值也最高，平均達2.3左右。單獨使用阿帕替尼及單獨使用順鉑的腫瘤代謝信號略低于空白對照組，T/M值幾乎均為1.9左右，較空白對照差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明經(jīng)過阿帕替尼或者順鉑治療后降低了腫瘤的代謝；而單獨阿帕替尼組及單獨順鉑組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。在三組聯(lián)合用藥組中，阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組腫瘤代謝信號

10、最低，T/M值約為1.2左右，差異較先阿帕替尼組及先順鉑組具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時用藥組明顯降低了腫瘤的代謝。B部分荷瘤裸鼠行免疫組化檢測VEGFR-2的表達，發(fā)現(xiàn)D0組及 D15組腫瘤組織 VEGFR-2呈高表達，D0組 VEGFR-2的表達量高達85.83%，D15組 VEGFR-2的表達量高達75.50%，差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。D5組VEGFR-2的表達量為61.67%，D10組的表達

11、量為64.33%，兩者之間差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。但D5，D10組較D0組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），這兩組較D15組差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1、阿帕替尼對 CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗腫瘤作用，能抑制腫瘤生長、降低腫瘤代謝及延長生存時間；阿帕替尼對鼻咽癌的抗腫瘤作用，主要是通過減少 VEGFR2的有效表達量從而抑制 VEGF-VEGFR血管通路信號從而抑制血管生成抑制腫瘤生長實