阿帕替尼聯(lián)合順鉑治療鼻咽癌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①靶向新藥阿帕替尼(Apatinib，YN968D1)是否對(duì) CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗腫瘤的作用；②阿帕替尼與化療藥物順鉑(cisplatin，DDP)聯(lián)合使用治療CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型是否具有協(xié)同作用，并探討阿帕替尼與順鉑聯(lián)合使用的最佳給藥順序從而產(chǎn)生最大的療效。 方法：132只裸鼠建立CNE-2鼻咽癌移植瘤模型后，隨機(jī)分為A部分：分6組，每組18只，分為空白對(duì)照組（NS0.1ml/d ip d1-7

2、）、單獨(dú)阿帕替尼組(Apatinib200mg/kg/d ip d1-7)、單獨(dú)順鉑組(DDP5mg/kg/d ig d1)、先阿帕替尼后順鉑組(Apatinib200mg/kg/d ip d1-7+DDP5mg/kg/d ig d8)、先順鉑后阿帕替尼組(DDP5mg/kg/d ig d1+Apatinib200mg/kg/d ip d2-8)、同時(shí)用藥組(DDP5mg/kg/d ig d1+Apatinib200mg/kg/d ip

3、 d1-7)。治療結(jié)束后第二天，采用頸椎脫臼法每組處死6只裸鼠，瘤體稱重，比較抑瘤率，并計(jì)算兩藥聯(lián)合效應(yīng)Q值，瘤體行免疫組化VEGFR-2抗體染色腫瘤組織檢測(cè)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞 VEGFR2（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2）的表達(dá)量，免疫組化CD31抗體染色腫瘤組織檢測(cè)腫瘤血管密度，行tunel檢測(cè)測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡的數(shù)量。每組另取6只裸鼠行小動(dòng)物18F-FDG PET-CT檢測(cè)通過(guò)觀察圖像及T/M值檢測(cè)腫瘤組織代謝情況。每組剩余6只裸鼠觀察生存期，

4、并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線圖。B部分共24只荷瘤裸鼠，隨機(jī)分為4組，每組6只，分為D0組（不治療組）、D5組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-4，第5天處死裸鼠）、D10組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-7，第10天處死裸鼠）、D15組（Apatinib200mg/kg/d ip d1-7，第15天處死裸鼠），處死裸鼠剝離腫瘤后，瘤體行免疫組化 VEGFR-2抗體染色腫瘤組織檢測(cè)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞VEGFR2（血

5、管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2）的表達(dá)量，從而動(dòng)態(tài)觀察在治療過(guò)程中及治療后腫瘤細(xì)胞的 VEGFR-2的表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：A部分荷瘤裸鼠空白對(duì)照組腫瘤生長(zhǎng)最快，各治療組的腫瘤體積及質(zhì)量的平均值較空白對(duì)照組低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組的腫瘤體積及質(zhì)量最低，差異較其他各治療組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各治療組裸鼠的抑瘤率分別為：?jiǎn)为?dú)阿帕替尼組15％，單獨(dú)順鉑組31%，先阿帕替尼組46%，

6、先順鉑組53%，阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組70%。阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組兩藥聯(lián)合效應(yīng)Q值為1.69，說(shuō)明兩藥連用產(chǎn)生協(xié)同作用。而先阿帕替尼組及先順鉑組兩組的Q值均小于1.5，說(shuō)明兩藥連用僅產(chǎn)生了疊加作用。單用阿帕替尼組的裸鼠平均生存時(shí)間為60天，明顯高于空白對(duì)照組（41天），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。單獨(dú)順鉑組的平均生存時(shí)間為67天，較單獨(dú)順鉑組差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有聯(lián)合用藥組中其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組裸鼠平均生

7、存時(shí)間最長(zhǎng)，達(dá)88天，較其他各組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。行免疫組化檢測(cè)示使用阿帕替尼治療后的裸鼠 VEGFR-2的表達(dá)、血管密度均明顯低于空白對(duì)照組及單用順鉑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而其中以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)給藥組VEGFR2的表達(dá)量及血管密度均最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。行 TUNEL檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡可見空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡數(shù)量很少，平均每個(gè)視野的凋亡細(xì)胞數(shù)約為3個(gè)左右。而單獨(dú)阿帕替尼組的

8、凋亡數(shù)量約為12個(gè)左右，單獨(dú)順鉑組的細(xì)胞凋亡數(shù)量約為15個(gè)左右，兩者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但這兩組的細(xì)胞凋亡數(shù)量較空白對(duì)照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。三組聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯高于空白對(duì)照組及單獨(dú)用藥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在這三組當(dāng)中，又以阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥的細(xì)胞凋亡數(shù)量最高，達(dá)34.67個(gè)，較先阿帕替尼組及先順鉑組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。行小動(dòng)物18F-FDG PET-C

9、T檢測(cè)檢測(cè)腫瘤組織代謝情況發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組的腫瘤最大，腫瘤代謝最強(qiáng)，整個(gè)腫瘤幾乎均呈高代謝信號(hào)， T/M值也最高，平均達(dá)2.3左右。單獨(dú)使用阿帕替尼及單獨(dú)使用順鉑的腫瘤代謝信號(hào)略低于空白對(duì)照組，T/M值幾乎均為1.9左右，較空白對(duì)照差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明經(jīng)過(guò)阿帕替尼或者順鉑治療后降低了腫瘤的代謝；而單獨(dú)阿帕替尼組及單獨(dú)順鉑組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在三組聯(lián)合用藥組中，阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組腫瘤代謝信號(hào)

10、最低，T/M值約為1.2左右，差異較先阿帕替尼組及先順鉑組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明阿帕替尼聯(lián)合順鉑同時(shí)用藥組明顯降低了腫瘤的代謝。B部分荷瘤裸鼠行免疫組化檢測(cè)VEGFR-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)D0組及 D15組腫瘤組織 VEGFR-2呈高表達(dá)，D0組 VEGFR-2的表達(dá)量高達(dá)85.83%，D15組 VEGFR-2的表達(dá)量高達(dá)75.50%，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。D5組VEGFR-2的表達(dá)量為61.67%，D10組的表達(dá)

11、量為64.33%，兩者之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但D5，D10組較D0組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這兩組較D15組差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1、阿帕替尼對(duì) CNE-2裸鼠鼻咽癌移植瘤模型具有抗腫瘤作用，能抑制腫瘤生長(zhǎng)、降低腫瘤代謝及延長(zhǎng)生存時(shí)間；阿帕替尼對(duì)鼻咽癌的抗腫瘤作用，主要是通過(guò)減少 VEGFR2的有效表達(dá)量從而抑制 VEGF-VEGFR血管通路信號(hào)從而抑制血管生成抑制腫瘤生長(zhǎng)實(shí)