骨碎補(bǔ)總黃酮對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫抑制小鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討骨碎補(bǔ)總黃酮（RDF）對環(huán)磷酰胺（CTX）誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠免疫功能的影響及其可能的作用機(jī)制，為骨碎補(bǔ)研究開發(fā)用于免疫調(diào)節(jié)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　60只SPF級(jí)昆明種小鼠隨機(jī)分為6組：正常對照組，CTX模型組，左旋咪唑組（LMS組，劑量為0.05g/kg），骨碎補(bǔ)總黃酮高、中、低劑量組（RDF-H、RDF-M和RDF-L組，劑量分別為0.8、0.4、0.2g/kg），每組10只，除

2、正常對照組外，其余各組小鼠腹腔注射CTX建立免疫抑制小鼠模型。給藥20天后，采血，處死小鼠，收集肝臟、脾臟和胸腺。分別檢測小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)；廓清指數(shù)K以及吞噬指數(shù)α；遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素水平；全自動(dòng)生化儀檢測小鼠外周血白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、淋巴細(xì)胞百分率（LYMPH％）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)（RDW-CV）、紅細(xì)

3、胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差（RDW-SD）等；酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測小鼠血清IL-2、TNF-α、IFN-γ含量水平；比色法檢測免疫抑制小鼠脾組織酸性磷酸酶（ACP）和乳酸脫氫酶（LDH）活性；MTT法檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)；HE染色法觀察小鼠脾組織病理切片；流式細(xì)胞儀檢測小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+T細(xì)胞數(shù)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）法檢測小鼠脾組織T-bet、GATA-3、IFN-γ、IL-4 mRN

4、A的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.RDF對免疫抑制小鼠非特異性免疫功能的影響
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CTX模型組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α都明顯低于正常對照組（P<0.01）；與CTX模型組相比較，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組均顯著提高免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)、廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α，LMS組和RDF-M、RDF-H組均可提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)（P<0.05或P<0.01）。

5、　　2. RDF對免疫抑制小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響
　　CTX模型組的WBC、RBC、HGB、LYMPH%、PLT、HCT顯著低于正常對照組（P<0.01），RDW-SD比正常對照組高（P<0.01），其他指標(biāo)MCHC、RDW-CV與正常對照組相比沒有顯著性差異；與CTX模型組比較，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組均能明顯提高CTX降低的WBC、RBC、HGB、LYMPH%、PLT、HCT水平（P<0.05或P<0.01

6、），各給藥組對MCHC、RDW-SD、RDW-CV沒有明顯作用，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3. RDF對免疫抑制小鼠血清溶血素水平、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、脾組織LDH和ACP活性的影響
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CTX模型組小鼠的耳腫脹度、血清溶血素水平、LDH和ACP活性較正常對照組顯著降低（P<0.05或P<0.01）；與CTX模型組比較，LMS組和RDF-H組可提高CTX降低的耳腫脹度，LMS組和RDF-M、RDF-H組均可提高免疫抑制

7、小鼠的血清溶血素水平和脾組織ACP活性，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組均能明顯提高脾組織LDH的活性水平（P<0.05或P<0.01）。
　　4. RDF對免疫抑制小鼠血清細(xì)胞因子的影響
　　ELISA試劑盒檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CTX模型組的IL-2、TNF-α、IFN-γ含量都顯著低于正常對照組（P<0.01）；與CTX模型組比較，LMS組和RDF-M、RDF-H組均都能明顯升高免疫抑制小鼠血清IL-2和IFN-

8、γ水平，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組均能明顯提高免疫抑制小鼠血清TNF-α含量水平（P<0.05或P<0.01）。
　　5. RDF對免疫抑制小鼠免疫細(xì)胞的影響
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，CTX模型組的CD4+ T細(xì)胞數(shù)、CD4+/CD8+比值、ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)均明顯降低，而CD8+ T細(xì)胞數(shù)明顯升高（P<0.05或P<0.01）；與CTX模型組比較，L

9、MS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組都可以提高CTX降低的CD4+ T細(xì)胞數(shù)和ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組都能降低CTX升高的CD8+ T細(xì)胞數(shù)，LMS組和RDF-M、RDF-H組可以提高CD4+/CD8+比值（P<0.05或P<0.01），而各給藥組對LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)相對于模型組來說有提高作用但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6. RDF對免疫抑制小鼠脾組織T-be

10、t、GATA-3、IFN-γ、IL-4 mRNA表達(dá)的影響
　　RT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，CTX模型組的T-bet、IFN-γmRNA的表達(dá)和T-bet/ GATA-3、IFN-γ/IL-4比值都明顯降低，而GATA-3、IL-4 mRNA的表達(dá)明顯升高（P<0.01）；與CTX模型組比較，LMS組和RDF-M、RDF-H組可提高T-bet mRNA的表達(dá)和T-bet/GATA-3比值，LMS組和RDF-L、RDF-

11、M、RDF-H組可提高CTX降低的IFN-γ mRNA的表達(dá)和IFN-γ/IL-4比值，LMS組和RDF-L、RDF-M、RDF-H組可降低CTX升高的GATA-3、IL-4 mRNA的表達(dá)，（P<0.05或P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　RDF可提高免疫抑制小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，巨噬細(xì)胞吞噬功能，脾組織LDH和ACP活性；提高血液中WBC、RBC、HGB、LYMPH%、PLT、HCT水平，血清溶血素水平以及遲發(fā)型超敏