黃芩莖葉總黃酮對CIA小鼠細胞免疫功能的影響.pdf

1、類風濕性關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一種累及周圍關節(jié)為主的系統(tǒng)性炎癥性自身免疫病。主要表現(xiàn)為關節(jié)滑膜的慢性炎癥,滑膜翳形成,軟骨及骨組織的破壞。其病因和發(fā)病機制尚不明確,但可以肯定的是RA與免疫異常有關。CD4+T細胞在RA發(fā)病中起關鍵作用,隨著近年對CD4+T細胞亞群及其在RA中的作用研究不斷深入,人們對RA發(fā)病機制的了解進一步加深,尋找新的治療靶點亦成為RA研究熱點。
　　近幾年來中西醫(yī)藥物在治療

2、RA中取得了一定成效,中藥以其多成分、多靶點、多途徑治療疾病的特點,在RA的治療研究中越來越多,黃芩莖葉總黃酮(Scutellaria baicalensis Stem-leaf Total Flavonoids SSTF)已被證實其具有較強的抗菌、抗炎、調(diào)節(jié)機體免疫力、抗病毒、解熱、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降壓、降血脂等藥理學活性,且高效低毒、不易產(chǎn)生抗藥性。本實驗以C57BL/6小鼠為研究對象,探討SSTF灌胃給藥對CIA小鼠細胞免疫功能的影

3、響及其作用機制,為進一步揭示RA的發(fā)病機制和黃芩莖葉的開發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　目的:
　　觀察黃芩莖葉總黃酮對CIA小鼠細胞免疫功能的影響,探討黃芩莖葉總黃酮對類風濕性關節(jié)炎模型的治療作用及其作用機制。
　　方法:
　　選用C57BL/6小鼠作為實驗對象,將雞Ⅱ型膠原與弗氏完全佐劑(含不滅活卡介苗2.5mg/ml)充分乳化,取100μl混合乳劑在C57BL/6小鼠尾根及背部多點皮內(nèi)注射,第21天同樣方法加強免疫。

4、將成功模型隨機分為3組:模型組、黃芩組、雷公藤組,另設正常對照組,藥物組于初次免疫后21天灌胃給藥,每天一次至初次免疫后56天結束。正常對照和模型組給等量生理鹽水。觀察各組動物的關節(jié)腫脹程度,關節(jié)炎指數(shù),關節(jié)病理學檢測、關節(jié)影像學觀察,并測量動物的脾臟指數(shù),流式細胞術檢測小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比例及脾淋巴細胞CD4+T淋巴細胞亞群Th1、Th2、Th17、Treg比例,flowcytomix檢測相關細胞因子IL

5、-10、IFN-γ表達水平。
　　結果:
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠關節(jié)腫脹度的影響:模型小鼠關節(jié)腫脹程度比正常組顯著增加,關節(jié)炎指數(shù)明顯增加(P<0.01)。給藥后治療組動物的關節(jié)腫脹程度較模型組有顯著降低,關節(jié)炎指數(shù)明顯下降(P<0.01),黃芩組和雷公藤組療效無明顯差異(P>0.05)。
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠關節(jié)病理學影響:模型組小鼠關節(jié)滑膜明顯增厚,大量炎性細胞浸潤、新生血管形成、關節(jié)軟骨和骨組織破壞。藥物組

6、小鼠關節(jié)滑膜也增厚、炎性細胞浸潤減輕、無關節(jié)軟骨和骨組織破壞。正常組無上述表現(xiàn)。
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠脾臟指數(shù)的影響:模型小鼠的脾臟指數(shù)顯著高于正常對照組;給藥組小鼠的脾臟指數(shù)與模型組比較下降顯著,且兩用藥組無明顯差異。
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠T淋巴細胞及其亞群的影響:⑴與正常組比較,模型小鼠外周血中CD3+、CD4+T細胞及CD4+/CD8+比值明顯增多(P<0.01);與模型組比較,藥物組小鼠外周血中CD3+及CD

7、4+T細胞數(shù)量減少(P<0.01),CD4+/CD8+比值明顯低于模型組(P<0.05),接近正常水平。且兩藥物組無明顯差異(P>0.05)。⑵與正常組比較,模型小鼠CD4+T淋巴細胞亞群Th1顯著增高(P<0.01),Th2無明顯變化(P>0.05);與模型組比較,藥物組小鼠CD4+T淋巴細胞中Th1細胞數(shù)量明顯降低(P<0.05),Th2比例增加(P<0.01),兩用藥組無明顯差異(P>0.05)。⑶與正常組比較,模型小鼠CD4+T

8、淋巴細胞亞群Th17及Treg細胞均顯著增高(P<0.01);與模型組比較,藥物組小鼠Th17及Treg細胞比例明顯降低(P<0.01),兩用藥組無明顯差異(P>0.05)。
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠IFN-γ、IL-10細胞因子的影響:與正常組比較,模型小鼠細胞因子IL-10分泌明顯減少(P<0.01),IFN-γ分泌顯著增多(P<0.01);與模型組比較,藥物組IL-10分泌顯著增多(P<0.05), IFN-γ分泌明顯減少(

9、P<0.05),且兩藥物組無明顯差異(P>0.05)。
　　黃芩莖葉總黃酮對小鼠關節(jié)影像學影響:模型組小鼠關節(jié)間隙變窄,關節(jié)面不光滑,骨膜內(nèi)新骨形成導致關節(jié)強直、畸形。藥物組小鼠關節(jié)雖與正常有所區(qū)別,但是關節(jié)沒出現(xiàn)強直、畸形。
　　結論:
　?、疟狙芯孔C實了黃芩莖葉總黃酮可以減輕CIA小鼠關節(jié)腫脹程度,保護骨關節(jié)及軟骨組織。
　?、泣S芩莖葉總黃酮可以調(diào)節(jié)CD4+T淋巴細胞亞群的平衡及其相關細胞因子IFN-γ、IL