二苯乙烯苷上調(diào)HO-1表達(dá)負(fù)向調(diào)控H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是動(dòng)脈粥樣硬化形成的重要機(jī)制。因此通過藥物干預(yù)，抑制其凋亡是防治動(dòng)脈粥樣硬化的重要策略。二苯乙烯苷（TSG）是一種二苯乙烯苷類化合物，通常從何首烏中提取獲得。本課題組的前期研究表明，TSG可以減少H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）的凋亡。但目前還不清楚 TSG是否具有其他的保護(hù)機(jī)制。本研究旨在研究TSG對外源性H2O2對HUVECs表達(dá)血紅素氧合酶-1（HO-1）的影響，并探討其在細(xì)胞凋亡中的功能。用300μ

2、mol/L濃度的 H2O2處理體外培養(yǎng) HUVECs，建立內(nèi)皮細(xì)胞凋亡模型。按分組要求，用不同濃度的TSG預(yù)處理HUVECs，然后利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR在mRNA水平和Western blot在蛋白水平檢測HO-1的變化情況；比色法測定 HO-1酶活性變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVECs的細(xì)胞凋亡；Western blot檢測Nrf2核轉(zhuǎn)位；干擾RNA及抑制劑分析HO-1對HUVECs凋亡的影響。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，陰性對照組HO-1

3、mRNA表達(dá)水平極低，H2O2處理后，HO-1僅有輕微增高。而給予不同濃度TSG處理后，HO-1 mRNA的表達(dá)與TSG濃度呈正相關(guān)。經(jīng)過不同的處理時(shí)間，HO-1 mRNA其表達(dá)量不同，6h開始升高，峰值在12h，然后開始下降。HO-1蛋白表達(dá)水平與mRNA趨勢一樣。同時(shí)，采用RNA合成抑制劑放線菌素D和蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮處理后，HO-1表達(dá)顯著降低。此外，TSG能誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位。采用Nrf2siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，HO-1表達(dá)降