平陽(yáng)霉素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡作用機(jī)制.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、血管瘤是最常見的良性血管病變,分為毛細(xì)血管瘤、海綿狀血管瘤、蔓狀血管瘤和混合性血管瘤。頭頸部體表及腔內(nèi)血管瘤,嚴(yán)重影響患者的容貌和器官功能,甚至并發(fā)大出血或呼吸道梗阻而危及患者生命,需要及時(shí)治療。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)血管瘤的治療主要包括口服藥物、局部藥物注射、激光、手術(shù)切除等,然而單純的激光或手術(shù)治療很難將血管瘤完整的切除,并且可能會(huì)對(duì)患者的容貌和頭面部器官的功能造成一定的影響。局部注射治療操作簡(jiǎn)單、療效顯著,成為近年來國(guó)內(nèi)外血管瘤治療最為推崇

2、的治療手段之一,其中比較常用的藥物有平陽(yáng)霉素、聚桂醇、普萘洛爾等。平陽(yáng)霉素是由我國(guó)學(xué)者自主研制并投入臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物,其化學(xué)名稱為N-[3-(4-氨基丁酸)氨基]丙氨基博來霉素A5,是博來霉素類抗腫瘤抗生素藥物的新品種。據(jù)報(bào)道,平陽(yáng)霉素瘤體內(nèi)注射治療頭頸部體表及腔內(nèi)血管瘤副作用小、療效顯著;地塞米松聯(lián)合平陽(yáng)霉素瘤體內(nèi)注射,具有療效增強(qiáng)作用。然而平陽(yáng)霉素、平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米治療血管瘤的確切機(jī)制仍然不清楚。
  研究發(fā)現(xiàn)平陽(yáng)霉素能

3、夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡的途徑有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑、死亡受體信號(hào)途徑和線粒體途徑,平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是通過哪種途徑進(jìn)行的,仍未見國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
  血管瘤是由過度增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞引起的,HUVEC為人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞,具有干細(xì)胞的潛能。我們以體外培養(yǎng)的HUVEC作為模型,通過流式細(xì)胞儀和蛋白免疫印跡研究平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡的機(jī)制,以及平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖及凋亡的影響,為其在臨床

4、上治療血管瘤提供理論依據(jù)。
  第一部分平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制
  目的:檢測(cè)不同濃度平陽(yáng)霉素(Pingyangmycin,PYM)作用24小時(shí)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及凋亡的影響,探討平陽(yáng)霉素誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡最佳濃度及有關(guān)作用機(jī)制。
  方法:用不同濃度的平陽(yáng)霉素作用HUVEC細(xì)胞24小時(shí),以細(xì)胞增殖-毒性8檢測(cè)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)

5、檢測(cè)比較0.1、1、10、100、1000μg/ml平陽(yáng)霉素作用24小時(shí)后對(duì)HUVEC細(xì)胞的抑制作用,用膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin-Ⅴ FITC/PI apoptosis kit)檢測(cè)不同濃度PYM對(duì)HUVEC細(xì)胞凋亡作用的影響,蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)不同濃度平陽(yáng)霉素作用HUVEC細(xì)胞后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)。
  結(jié)果:CCK-8結(jié)果顯示隨平陽(yáng)霉

6、素濃度的升高,對(duì)HUVEC細(xì)胞的抑制作用越明顯(P<0.05);然平陽(yáng)霉素藥物濃度100μg/ml和1000μg/ml組相比,差異無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。流式細(xì)胞檢測(cè)顯示0.1、1、10、100μg/ml平陽(yáng)霉素作用24小時(shí)后細(xì)胞凋亡率分別為(5.37±1.63)%、(12.7±1.57)%、(24.7±6.99)%、(23.6±0.80)%,壞死率分別為(4.87±2.09)%、(7.32±3.88)%、(39.1±6.1

7、8)%、(66.3±0.40)%,隨藥物濃度增加而增高,過高濃度細(xì)胞壞死占主導(dǎo),和對(duì)照組相比,差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot結(jié)果顯示平陽(yáng)霉素各濃度作用24 h后促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78和CHOP的表達(dá)。
  結(jié)論:平陽(yáng)霉素在體外能明顯抑制HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)并促進(jìn)其凋亡,當(dāng)平陽(yáng)霉素濃度達(dá)到100μg/ml時(shí),細(xì)胞以壞死為主;平陽(yáng)霉素可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞凋亡。
  第二

8、部分平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖和凋亡的影響
  目的:探討平陽(yáng)霉素(Pingyangmycin,PYM)聯(lián)合地塞米松(dexamethasone,DEX)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系HUVEC細(xì)胞增殖和凋亡的的影響,為臨床上平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松治療血管瘤提供理論依據(jù)。
  方法:設(shè)置平陽(yáng)霉素組、地塞米松組、平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松組(聯(lián)合組A、B、C、D),分別作用于體外培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞24小時(shí),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形

9、態(tài);細(xì)胞增殖-毒性8(cell counting kit-8,CCK-8)檢測(cè)各組對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC細(xì)胞的凋亡率;Western blot檢測(cè)HUVEC細(xì)胞凋亡蛋白caspase-3的表達(dá)情況。
  結(jié)果:平陽(yáng)霉素(0.1、1、10、100μg/ml)、地塞米松(0.1、1、10、100μg/ml)均能使貼壁細(xì)胞密度下降,變圓、變形的漂浮細(xì)胞增多,平陽(yáng)霉素、地塞米松對(duì)HUVEC細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖均有明

10、顯的抑制作用,且呈濃度依賴性;當(dāng)?shù)蜐舛绕疥?yáng)霉素(≤10μg/ml)聯(lián)合地塞米松具有協(xié)同效應(yīng)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,與平陽(yáng)霉素單獨(dú)作用比較,1μg/ml平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松(0.1、1、10、100μg/ml)細(xì)胞凋亡率逐漸增加,差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與平陽(yáng)霉素單獨(dú)作用比較,1μg/ml平陽(yáng)霉素聯(lián)合地塞米松(0.1、1、10、100μg/ml)作用細(xì)胞后caspase-3表達(dá)逐漸增

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