彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤miRNA生物標(biāo)志物的挖掘與驗(yàn)證.pdf

1、彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）是最常見的非霍奇金淋巴瘤，具有高侵襲性，高異質(zhì)性等特點(diǎn)。臨床上通過淋巴結(jié)切除活檢并結(jié)合免疫組化對淋巴瘤進(jìn)行診斷及分型，但這種診斷方法具有一定的局限性。其一，這是一種有創(chuàng)的檢查手段，如果病例標(biāo)本難以獲得將增大診斷難度；其二，當(dāng)病變部位發(fā)生感染，壞死等情況時，則會造成診斷困難，需要進(jìn)行多次活檢。細(xì)針穿刺如果能提取足夠的組織樣本，結(jié)合可靠的生物標(biāo)志物如微小RNA（miRNA）可以克服組織活檢的局限性。miRN

2、A是內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA，研究表明其在不同疾病狀態(tài)下的表達(dá)差異顯著，并且具有穩(wěn)定性及可檢測性等特點(diǎn)。因此，miRNA為發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物提供了契機(jī)。
　　隨著二代測序技術(shù)的發(fā)展，RNA測序（RNA-seq）已成為轉(zhuǎn)錄組分析的新的重要手段?；谛乱淮鷾y序技術(shù)的miRNA測序，可一次性獲得數(shù)百萬甚至數(shù)十億的序列數(shù)據(jù)信息，能夠快速鑒定出不同組織、發(fā)育階段、疾病狀態(tài)下的miRNA及其表達(dá)差異，為研究miRNA在發(fā)育與復(fù)雜疾病

3、中的作用及其生物學(xué)影響提供了有力工具。臨床上缺少可靠敏感的miRNA檢測方法成為miRNA發(fā)展為可用生物標(biāo)志物的阻礙。miRNA衍生片段長度多態(tài)性（miRFLP）定量分析法是通過DNA片段長度多態(tài)性熒光定量分析來完成miRNA的分子數(shù)絕對定量檢測的方法，可以快速、準(zhǔn)確地獲得樣本中miRNA的拷貝數(shù)。
　　在本文中，通過搜索二代測序數(shù)據(jù)庫-SRA獲得B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的miRNA測序數(shù)據(jù)，針對每個人類miRNA在樣本中的表達(dá)進(jìn)行目的性

4、的處理和分析，篩選出DLBCL生物標(biāo)志物的候選miRNA。為了對候選miRNA的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證，獲取B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的福爾馬林浸泡-石蠟包埋樣本，使用miRFLP對樣本中的候選miRNA進(jìn)行檢測，對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并使用支持向量機(jī)構(gòu)建分類模型，評估候選miRNA對DLBCL診斷的效能。
　　在SRA數(shù)據(jù)庫中，我們共收集31個B細(xì)胞淋巴瘤相關(guān)的miRNA測序數(shù)據(jù)，并使用自主研發(fā)的二代測序分析軟件-miRay對這些數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，

5、結(jié)合已發(fā)表文獻(xiàn)，最終確認(rèn)11個候選miRNA生物標(biāo)志物：miR-378a，miR-21，miR-146a，miR-25，miR-146b，miR-155，miR-181a，miR-16，miR-17，miR-150，miR-222。隨后使用miRFLP方法對138個淋巴瘤石蠟切片樣本中的11個候選miRNA進(jìn)行檢測?；谄錂z測結(jié)果分析，我們發(fā)現(xiàn)同時使用miR-150和miR-155構(gòu)建分類器來區(qū)分反應(yīng)性增生與淋巴瘤，反應(yīng)性增生與DLBC