毛蕊老鸛草有效成分提取及體外抗凝血活性檢測(cè).pdf

1、目的：毛蕊老鸛草（Geranium eriostemon Fisch.ex DC.）是牻牛兒苗科老鸛草屬多年生草本植物。目前關(guān)于黑龍江省產(chǎn)毛蕊老鸛草的系統(tǒng)性研究報(bào)道很少，大部分為生藥鑒定及藥用化學(xué)成分的研究等方面。因此本課題選擇毛蕊老鸛草為研究對(duì)象，旨在為進(jìn)一步改進(jìn)毛蕊老鸛草有效成分提取技術(shù)奠定基礎(chǔ)，為其制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更合理開(kāi)發(fā)和利用這一藥用資源提供依據(jù)。
　　方法：取新鮮的毛蕊老鸛草為實(shí)驗(yàn)材料，采用石蠟切片技術(shù)，分別制作根、莖、

2、葉、花梗的永久切片，置于顯微鏡下觀察并拍照。采用超聲提取法對(duì)毛蕊老鸛草有效化學(xué)成分總黃酮及鞣質(zhì)進(jìn)行提取，通過(guò)球面對(duì)稱設(shè)計(jì)優(yōu)化，得到總黃酮及鞣質(zhì)的最佳提取工藝。水分含量的測(cè)定參照GB5009.3—2010中的直接干燥法測(cè)定?；曳趾康臏y(cè)定參照GB5009.4—2010灼燒法測(cè)定。采用紫外分光光度法對(duì)樣品中礦質(zhì)元素含量進(jìn)行測(cè)定。采用熱提取法對(duì)莽草酸進(jìn)行提取，提取工藝為15倍量水80℃提取100min，提取液濃縮，經(jīng)柱層析得莽草酸粗粉，采用高

3、效液相色譜法進(jìn)行莽草酸純度檢測(cè)，色譜條件為：色譜柱為Agilent C18(150 mm*4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為0.1％磷酸溶液-甲醇(90:10)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm，柱溫為25℃。應(yīng)用凝血酶原試劑盒對(duì)所得的莽草酸樣品進(jìn)行抗凝血活性檢測(cè)。
　　結(jié)果：毛蕊老鸛草根皮層細(xì)胞內(nèi)含有方晶、草酸鈣簇晶以及淀粉粒，維管束無(wú)限外韌型，形成層明顯；葉為異面葉，主脈維管束外韌型，柵欄組織、海綿組織分化明顯，葉

4、肉組織中可見(jiàn)草酸鈣簇晶；花梗表皮可見(jiàn)毛茸，皮層約占花梗橫斷面的1/4，維管束外韌型，4~5束。通過(guò)球面對(duì)稱設(shè)計(jì)優(yōu)化，得到總黃酮的最佳提取工藝為：40倍量60%乙醇提取35min。鞣質(zhì)的最佳提取工藝為：24倍量20%乙醇提取50min。不同時(shí)期毛蕊老鸛草的總黃酮含量為：5月1.59%、6月1.78%、7月1.87%、8月1.95%、9月1.80%；不同時(shí)期毛蕊老鸛草中鞣質(zhì)的含量為：5月2.13%、6月3.32%、7月3.68%、8月3.2

5、0%、9月2.78%。測(cè)得毛蕊老鸛草中灰分含量為28.67%、水份含量為8.16%；鐵元素含量223.6μg/g、鋅元素含量445.7μg/g、錳元素含量303.9μg/g、銅元素含量209.1μg/g、鉀元素含量868.9μg/g、鈣元素含量1951.9μg/g、鎂元素含量1347.8μg/g。經(jīng)計(jì)算莽草酸的純度為44.3%。
　　結(jié)論：對(duì)毛蕊老鸛草不同部位的組織觀察中發(fā)現(xiàn)，根、葉、花梗的維管束均為外韌型維管束，花梗維管束4~5