地耳草有效成分體外抗SCCmec Ⅲ型MRSA的活性研究.pdf

1、目的:1.提取，分離藤黃科金絲桃屬植物地耳草(Hypericum japonicum ThunbMurray)的有效成分。2.探討單體化合物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性，以及活性單體與臨床常用的抗生素聯(lián)合用藥后抗MRSA的作用效果。
　　方法:1.結(jié)合細菌藥物敏感性試驗與柱層析分離方法，對地耳草乙酸乙酯部位的分段產(chǎn)物進行生物活性跟蹤篩選，對具有活性的片段進一步分離純化得到單體化合物，結(jié)合現(xiàn)代波譜分析技術(shù)和理化方

2、法鑒定其結(jié)構(gòu);2.對成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院收集的45株MRSA，采用藥敏紙片測定對16種抗菌藥物的耐藥性;應用多重PCR對MRSA進行SCCmec基因分型。3.對分離得到的6個單體化合物，采用肉湯二倍稀釋法測定其最低抑菌濃度(MIC）和最低殺菌濃度(MBC)進行了抗MRSA活性研究。根據(jù)測試結(jié)果，進一步采用微量棋盤稀釋法分別測定3個活性單體與臨床常用抗生素（氨芐西林，頭孢他啶，左氧氟沙星，阿奇霉素）聯(lián)合用藥對SCCmecⅢ型MRSA的抑菌效

3、果，以部分抑菌濃度指數(shù)(FICI)來評價其聯(lián)合用藥效果;進一步繪制時間殺菌曲線驗證受試藥物與臨床常用抗生素的協(xié)同作用。另外，采用紙片法考察二氫槲皮素及糖苷類化合物與喹諾酮類抗生素的協(xié)同作用。
　　結(jié)果:1.從該植物中跟蹤篩選分離得到了6個單體化合物:(1)異巴西紅厚殼素，(2)2，6-二羥基-3，5-二甲基-1-異丁酰苯-4-O-葡萄糖苷，(3)二氫槲皮素-7-O-鼠李糖昔、(4)二氫山奈酚-3-O-鼠李糖苷，(5)鄰苯二甲酸二丁

4、酯，(6)槲皮苷。2.常用抗生素的敏感性結(jié)果顯示，對氨芐西林、青霉素、苯唑西林、頭孢西丁均100％耐藥，對萬古霉素、利萘唑胺敏感，對其他抗生素均存在一定的耐藥;本醫(yī)院MRSA以SCCmecⅢ型為主，占75.6％(34/45)，SCCmecⅠ型為4.4％(2/45)，SCCmecⅡ型為17.8％(8/45)，SCCmecⅣ型為2.2％(1/45)。3.化合物1、3和4對臨床來源的MRSA均表現(xiàn)出較好的抗菌活性，MIC50分別為8μg/mL

5、、32μg/mL、64μg/mL; MIC90分別為16μg/mL、64μg/mL、128μg/mL。化合物2、5和6的MIC大于1mg。針對SCCmecⅢ型，化合物1、3、4與氨芐西林聯(lián)合為協(xié)同(FICI≤0.5)或相加(0.5＜FICI≤1.0)作用，與頭孢他啶和左氧氟沙星聯(lián)合為協(xié)同作用(FICI≤0.5)，與阿奇霉素聯(lián)合為無關(guān)作用(1.0＜FICI≤2.0)。隨機抽取的1株MRSA4的時間-殺菌曲線顯示，合用時log10CFU/m

6、L比化合物或抗生素單用時明顯下降。聯(lián)合用藥結(jié)果顯示二氫槲皮素及糖苷類化合物分別與3個喹諾酮類抗生素合用FICI≤0.5，log10CFU/mL比化合物或抗生素單用時明顯下降，抑菌圈比化合物或抗生素單用時明顯增大。
　　結(jié)論:地耳草中分離得到的化合物1、3和4，不僅有較好的抗MRSA活性，而且與氨芐西林、頭孢他啶、左氧氟沙星聯(lián)合用藥有相加或協(xié)同作用，可以增強或逆轉(zhuǎn)三個抗生素的抗SCCmecⅢ型MRSA的活性;二氫槲皮素及糖苷類化合物