厚樸酚對(duì)戊四氮慢性致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　癲癇為神經(jīng)內(nèi)科一組常見的綜合征，各個(gè)年齡階段均可發(fā)生，該病癥可反復(fù)發(fā)作，如不及時(shí)治療會(huì)威及生命?，F(xiàn)已有多種抗癲癇藥物相繼問世，但這些藥物大部分以控制癥狀為主，且治療療程長、副作用相對(duì)較多，部分患者遵醫(yī)囑服用藥物后仍不能控制癥狀。常有患者因治療過程中停藥或未經(jīng)醫(yī)師指導(dǎo)換藥而功虧一簣，其難治性給患者及家屬帶來生活和心理上的極大壓力。
　　癲癇是由腦部異常放電所產(chǎn)生的腦部功能紊亂引起的。有研究證據(jù)表明，癲癇的多次發(fā)作后

2、可對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生不可逆的損傷，尤以海馬等邊緣系統(tǒng)神經(jīng)元的損傷為甚。癲癇發(fā)作可使中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)形式多樣的病理改變，包括神經(jīng)元丟失、凋亡、膠質(zhì)纖維增生、苔蘚纖維增多等，其中細(xì)胞凋亡是神經(jīng)元損傷的主要形式。癲癇對(duì)于腦部的損傷是嚴(yán)重的，但目前尚無有效的腦保護(hù)藥物。厚樸酚是一種傳統(tǒng)中藥，有研究顯示其單體具有中樞鎮(zhèn)靜、抑制炎癥反應(yīng)、抗衰老等多種藥理學(xué)作用。這種單體有否保護(hù)癲癇腦損傷的作用是一個(gè)值得研究的課題。
　　本研究擬以戊四氮(PT

3、Z)慢性致癇的SD大鼠作為對(duì)象，用厚樸酚單體成分進(jìn)行干預(yù)，通過行為學(xué)、免疫組織化學(xué)和Western bolt等技術(shù)方法，檢測(cè)其在改善行為、保護(hù)神經(jīng)元的作用，為研制新型抗癲癇損傷藥物提供基礎(chǔ)研究資料。
　　方法:
　　SPF級(jí)成年雄性SD大鼠75只，實(shí)驗(yàn)起始體重200±20g，隨機(jī)均分為溶媒對(duì)照組(NS)、單純戊四氮致癇組(PTZ)、高劑量厚樸酚+PTZ組(H)、中劑量厚樸酚+PTZ組(M)和低劑量厚樸酚+PTZ組(L)，用腹

4、腔注射PTZ方法復(fù)制癲癇動(dòng)物模型。以PTZ點(diǎn)燃癲癇發(fā)生率評(píng)價(jià)其為行變化，通過尼氏染色觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的變化，用Western bolt、免疫組化檢測(cè)海馬凋亡因子Caspase-3的表達(dá)、免疫酶聯(lián)法檢測(cè)TNF-α的表達(dá)以檢測(cè)對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　結(jié)果:
　　1、行為學(xué)觀察結(jié)果
　　對(duì)第7天，14天，21天，28天，35天和42天的點(diǎn)燃率的統(tǒng)計(jì)中，PTZ組大鼠點(diǎn)燃率均顯著大于各藥物控制組及NS組，并隨著厚樸酚干預(yù)

5、劑量的增加PTZ點(diǎn)燃率有下降趨勢(shì)。
　　2、免疫酶聯(lián)法檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)的TNF-α表達(dá)結(jié)果
　　各組大鼠海馬組織中PTZ組(284.45±20.70)的TNF-α表達(dá)量顯著性地高于其他組(P＜0.05); NS組（144.01±28.85）則低于其他各組;在藥物干預(yù)組中，高劑量組（186.43±21.34）、中劑量組（189.44±22.12）、低劑量組（192.14±39.01）間無顯著性差異（P＞0.1）。
　　

6、3、Western bolt檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Caspase-3蛋白表達(dá)水平
　　PTZ組大鼠海馬組織Caspase-3蛋白水平（3.01±0.56）顯著地高于其他各組(P＜0.05);藥物干預(yù)組中，低劑量組（2.50±0.46）顯著高于其他兩組(P＜0.05);中劑量組（1.98±0.40）高于高劑量組（1.44±0.32）(P＜0.05);NS組表達(dá)量最少（P＜0.05）。
　　4、免疫組化檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Caspas

7、e-3陽性神經(jīng)元的結(jié)果
　　PTZ組的Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)，在CA1區(qū)（76.57±5.79）和CA3區(qū)（71.05±5.11）均顯著高于各藥物干預(yù)組（P＜0.05）;NS組的CA1區(qū)（31.12±5.01）、CA3區(qū)（17.55±3.56）均顯著低于其余各組的陽性細(xì)胞數(shù);3個(gè)藥物干預(yù)組的海馬CA1區(qū)的Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)則隨劑量的增加而顯著減少(P＜0.05)，既低劑量組（57.33±7.26）＞中劑量組（47.

8、81±5.99）＞高劑量組（39.57±4.16）;而在海馬CA3區(qū)，低劑量組（47.98±4.33）顯著多于高劑量組（33.63±1.13）和中劑量組（33.78±4.39）(P＜0.05)，但高、中兩組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　5、尼氏染色檢測(cè)海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的結(jié)果
　　PTZ組海馬區(qū)CA1和CA3區(qū)的神經(jīng)元顯示出細(xì)胞固縮、核分離和溶解等細(xì)胞凋亡的特征，且細(xì)胞數(shù)量明顯減少、排列散亂。藥物控制組亦可見少量

9、神經(jīng)元腫脹，胞核染色深淺不均等現(xiàn)象，但神經(jīng)元數(shù)量較比PTZ組明顯增多、損傷小、細(xì)胞排列較規(guī)整。NS組海馬CA1及CA3區(qū)海馬結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，椎體細(xì)胞排列規(guī)整，胞漿呈均勻染色清晰的紫藍(lán)色，未見明顯丟失。
　　上述5項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果顯示，較比模型動(dòng)物，厚樸酚干預(yù)后大鼠的癲癇點(diǎn)燃率、海馬區(qū)凋亡因子(Caspase-3、TNF-α)的表達(dá)水平均顯著降低、細(xì)胞的存活數(shù)量顯著升高，細(xì)胞形態(tài)也明顯好于PTZ組，有明顯的劑量依賴關(guān)系。
　　結(jié)論:<