青藤堿對戊四氮致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用及機制研究.pdf

1、第一部分：青藤堿對戊四氮致癇大鼠的抗癲癇及神經(jīng)保護作用
　　癲癇是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以反復(fù)性、急性發(fā)作為特征，常導(dǎo)致認(rèn)知功能損傷、精神障礙甚至死亡，嚴(yán)重危害人類健康和生活質(zhì)量，而現(xiàn)有的抗癲癇藥對相當(dāng)一部分患者無效或不敏感，因此，迫切需要尋找新的抗癲癇藥物。青藤堿是從中藥青風(fēng)藤中提取的生物堿單體，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、神經(jīng)保護等作用，但其對癲癇的影響還未見報道。
　　目的:
　　觀察青藤堿對戊四氮致癇大鼠行為學(xué)

2、、海馬神經(jīng)元損傷和認(rèn)知功能的影響。
　　方法：
　　通過戊四氮建立慢性點燃癲癇大鼠模型，觀察青藤堿對戊四氮致癇大鼠行為學(xué)的影響；采用 HE染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)方面的變化；使用 Hoechst33258染色和Western blot方法檢測海馬神經(jīng)元凋亡情況；采用Morris水迷宮方法檢測大鼠學(xué)習(xí)記憶的能力。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)結(jié)果：連續(xù)給予亞驚厥劑量戊四氮腹腔注射后，大鼠發(fā)作等級逐漸升高，死亡率增

3、加，癲癇發(fā)作的潛伏期縮短，持續(xù)時間延長；而給予不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)后可明顯降低癲癇發(fā)作級別，降低死亡率，延長癲癇發(fā)作潛伏期和縮短癲癇持續(xù)時間。
　　2. HE染色結(jié)果：和正常對照組大鼠相比，戊四氮致癇大鼠海馬CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元可見排列紊亂、嗜酸性變、核濃縮、核深染等異常改變，而給予不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)后明顯減輕神經(jīng)元的損傷。
　　

4、3. Hoechst33258染色結(jié)果：和正常對照組大鼠相比，戊四氮致癇大鼠海馬CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元胞核呈致密濃染或呈碎塊狀，出現(xiàn)明顯的凋亡，而給予不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)后明顯減輕神經(jīng)元的凋亡。
　　4.Western blot結(jié)果：和正常對照組大鼠比較，戊四氮致癇大鼠海馬神經(jīng)元Bax和活化的caspase-3表達(dá)顯著增加，Bcl-2表達(dá)顯著減少，而給予不同劑量SN（20mg/kg，4

5、0mg/kg，80mg/kg）干預(yù)后明顯減少Bax和活化的caspase-3的表達(dá)，增加的Bcl-2表達(dá)。
　　5. Morris水迷宮實驗結(jié)果：和正常對照組大鼠相比，戊四氮致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，而給予不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)后顯著改善癲癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　結(jié)論：
　　青藤堿能抑制戊四氮致癇大鼠癲癇發(fā)作，減輕神經(jīng)元損傷，改善其學(xué)習(xí)記憶能力，具有神經(jīng)保護作用。

6、r>　　第二部分：青藤堿抗癲癇及神經(jīng)保護作用的機制研究
　　NLRP1炎癥小體是由NOD樣受體NLRP1、接頭蛋白ASC和caspase-1組成的多蛋白復(fù)合物，它被激活后可剪切pro-IL-1β和pro-IL-18至成熟的IL-1β和IL-18，參與炎癥反應(yīng)，鉀離子、酸中毒、氧化應(yīng)激等都可調(diào)節(jié)NLRP1炎癥小體激活，但是傳統(tǒng)抗炎抗風(fēng)濕藥物青藤堿對NLRP1炎癥小體的影響還未見報道。
　　目的:
　　觀察青藤堿對戊四氮致

7、癇大鼠海馬神經(jīng)元NLRP1炎癥小體激活及其相關(guān)炎癥因子表達(dá)的影響，探討其抗癲癇和神經(jīng)保護作用的可能機制，以期為青藤堿成為新的潛在抗癲癇藥提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　建立戊四氮慢性點燃癲癇大鼠模型，采用Western blot檢測致癇大鼠海馬神經(jīng)元中NLRP1、Caspase-1和ASC蛋白的表達(dá)情況，Real time-QPCR檢測NLRP1、Caspase-1和ASC mRNA的表達(dá)水平，探討青藤堿對致癇大鼠海馬神經(jīng)元

8、炎癥小體復(fù)合物表達(dá)情況的影響；采用Western blot檢測大鼠海馬神經(jīng)元中IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α蛋白的表達(dá)水平，ELISA檢測大鼠海馬神經(jīng)元 IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α的含量變化，探討青藤堿對炎癥因子相關(guān)蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　1. Western blot結(jié)果：與對照組比較，PTZ組NLRP1、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、IL-6和TNF-α等表達(dá)明

9、顯增加，而不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)使上述蛋白表達(dá)明顯下降。
　　2. Real time-QPCR結(jié)果：與對照組比較，PTZ組的NLRP1、Caspase-1和ASC mRNA表達(dá)水平明顯上升，而不同劑量SN（20mg/kg，40mg/kg，80mg/kg）干預(yù)使NLRP1、Caspase-1和ASC mRNA表達(dá)水平明顯下降，且呈濃度相關(guān)性。
　　3. ELISA結(jié)果：與對照組比較