子癇前期大鼠微循環(huán)改變及選擇素對其影響.pdf

1、目的：子癇前期(Preeclampsia, PE)是一種妊娠期并發(fā)癥，其臨床特點(diǎn)主要是孕20周出現(xiàn)的高血壓和蛋白尿，或合并其他系統(tǒng)的病變，比如血小板減少、肝酶升高、腎功能不全、肺水腫、視覺障礙和腦功能紊亂。子癇前期是導(dǎo)致母嬰不良妊娠結(jié)局的主要原因，其發(fā)病率逐年增長。研究發(fā)現(xiàn)子癇前期與母嬰將來罹患心血管疾病和代謝性疾病有關(guān)。炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞損傷和白細(xì)胞及血小板的活化可導(dǎo)致全身的微循環(huán)障礙，這是子癇前期的發(fā)病特點(diǎn)。選擇素介導(dǎo)炎癥時(shí)白細(xì)胞的

2、早期黏附，包括P-選擇素(P-selectin)、E-選擇素(E-selectin)和L-選擇素(L-selectin)。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射NO合酶抑制劑左旋亞硝基精氨酸甲酯(Nitro-L-arginine methylester, L-NAME)的方法建立子癇前期大鼠模型，擬通過觀察腸系膜微循環(huán)和胎盤超微結(jié)構(gòu)改變，測定選擇素在子癇前期孕鼠的表達(dá)情況，探討子癇前期大鼠微循環(huán)改變及選擇素對子癇前期微循環(huán)障礙的影響，為子癇前期的發(fā)病提供新

3、的理論依據(jù)和診療思路。
　　方法：①購買10周齡的SD大鼠，雌雄各30只。按雌：雄比例為1:1合籠，觀察飼養(yǎng)籠內(nèi)是否有陰道栓脫落，若看到有陰道栓，則規(guī)定為孕第1天。②30只孕鼠中隨機(jī)選取20只孕鼠用來建立子癇前期孕鼠模型，孕7-11天連續(xù)腹腔注射L-NAME，模型成功13只，其中選取10只作為子癇前期組。剩余10只孕鼠作為對照組，孕7-11天連續(xù)腹腔注射等量的生理鹽水。孕第5、9和17天定時(shí)測量兩組孕鼠尾動(dòng)脈收縮壓(Systoli

4、c blood pressure, SBP)和收集24h尿液。模型成功標(biāo)準(zhǔn)是收縮壓升高30mmHg以上。③孕19天，麻醉兩組孕鼠，待麻醉成功后，使用WX-9B型微循環(huán)顯微鏡觀察腸系膜微循環(huán)，待觀察完畢后采血和胎盤組織。使用透射電鏡(transmission electron microscopy,TEM)觀察胎盤的超微結(jié)構(gòu)改變，主要是觀察合體滋養(yǎng)細(xì)胞的變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent a

5、ssay, ELISA)測定血漿中可溶性 P-選擇素(soluble P-selectin, sP-selectin)、可溶性E-選擇素(soluble E-selectin, sE-selectin)和L-選擇素(soluble L-selectin, sL-selectin)的含量，使用免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry, IHC)觀察P-selectin和E-selectin在胎盤的表達(dá)情況，使用軟件圖像分

6、析得出平均光密度值(Mean optical Density, MOD)。④采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析后，對于符合正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊的數(shù)據(jù)則使用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)性檢驗(yàn)但方差不齊則使用兩獨(dú)立樣本的t'檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)性檢驗(yàn)則采用兩獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)。取α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴收縮壓和24h尿蛋

7、白濃度：子癇前期組與對照組比較，兩組大鼠孕5天的收縮壓和24h尿蛋白濃度無明顯差異（均P>0.05）；子癇前期組孕鼠孕9天、孕17天的收縮壓和24h尿蛋白濃度均高于對照組同日的收縮壓和24h尿蛋白濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.001）。⑵對照組的腸系膜微血管壁整齊光滑，形態(tài)柔和，自然彎曲，血管周圍無滲出；子癇前期組的腸系膜微血管壁迂曲，邊緣不整齊，血管周圍有少量滲出。⑵子癇前期組腸系膜微靜脈內(nèi)可見大量白細(xì)胞貼壁滾動(dòng)，滾動(dòng)速度緩慢，白

8、細(xì)胞黏附于血管壁并聚集；對照組腸系膜微靜脈內(nèi)僅有白細(xì)胞貼壁快速滾動(dòng)，無白細(xì)胞貼壁黏附和白細(xì)胞聚集。⑶子癇前期組的毛細(xì)血管內(nèi)可見紅細(xì)胞聚集，而對照組無紅細(xì)胞聚集。⑷對照組的胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)含有豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有少量脂滴（空泡狀變性）；與對照組相比，子癇前期組的胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量脂滴。⑸孕鼠血漿中的sP-selectin、sE-selectin和sL-selectin的濃度，子癇前

9、期組均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.001）。⑹IHC:P-selectin和E-selectin在孕鼠胎盤中表達(dá)主要位于合體滋養(yǎng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)。P-selectin和E-selectin在子癇前期組的MOD均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.001）。
　　結(jié)論：①腹腔注射NO合酶抑制劑L-NAME的方法成功建立子癇前期大鼠模型。②子癇前期大鼠腸系膜微循環(huán)的變化，說明母體全身出現(xiàn)微循環(huán)障礙。③

10、sP-selectin、sE-selectin和sL-selectin在子癇前期大鼠血漿中的高表達(dá)，與腸系膜微循環(huán)改變可能有關(guān)，其可能通過參與白細(xì)胞活化、內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂、炎癥反應(yīng)和血小板活化，導(dǎo)致子癇前期大鼠的機(jī)體微循環(huán)障礙。④子癇前期大鼠胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化說明胎盤微循環(huán)障礙。⑤P-selectin和E-selectin在子癇前期大鼠胎盤中的高表達(dá)，與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變可能有關(guān)，其可能參與胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂和血小板活