Axl在子癇前期EPCs中的表達及對其功能的影響.pdf

1、本文主要從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 Axl在子癇前期患者及正常妊娠者EPCs中的表達
　　目的：
　　檢測Axl在子癇前期患者及正常妊娠者的EPCs中的表達。
　　方法：
　　1.分離并培養(yǎng)兩組患者臍血中的EPCs；
　　2.采用RT-PCR方法測定兩組EPCs中Axl mRNA的表達；
　　3.采用Western Blotting方法測定兩組EPCs中Axl蛋白的表達。
　　結(jié)

2、果：
　　1.將臍帶血分離出PBMCS（peripheral blood mononuclear cells）并培養(yǎng)。培養(yǎng)至第七天時，可見細胞呈集落樣分布，稱CFUs(clony-forming units)，呈現(xiàn)中心為圓形細胞，外周為紡錘形細胞樣的集落。
　　2.子癇前期患者EPCs中的Axl mRNA（25.77±8.69 vs.1.55±0.67, P<0.05）及蛋白（17.00±6.36 vs.1.03±0.20,

3、 P<0.05）的表達量明顯高于正常妊娠者的EPCs，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　Axl在子癇前期患者EPCs中的表達高于正常妊娠者。
　　第二部分 Axl抑制劑對EPCs功能的作用
　　目的：
　　研究抑制EPCs的Axl信號通路之后，其細胞增殖能力、分化能力、遷移能力及粘附能力的改變，了解Axl在EPCs功能中所起的作用。
　　方法：
　　1.用臍血分離培養(yǎng)出EPCs，將細胞分為實

4、驗組、陰性對照組、空白對照組。實驗組培養(yǎng)基中加入Axl抑制劑(BMS777-607，BioVision，USA，已證實其對Gas6/Axl信號通路的抑制作用)，濃度為5.64ng/ml，等體積的DMSO（BMS777-607的溶劑）加入陰性對照組的培養(yǎng)基中，而空白對照組培養(yǎng)基不做任何處理，各組EPCs邊培養(yǎng)邊進行各項細胞實驗；
　　2.采用CCk8方法檢測抑制劑處理后的EPCs細胞增殖能力；
　　3.采用Transwell遷

5、移實驗來檢測抑制劑處理后的EPCs細胞遷移能力；
　　4.采用細胞分化實驗檢測抑制劑處理后的EPCs細胞分化能力；
　　5.采用細胞粘附實驗檢測抑制劑處理后的EPCs細胞粘附能力。
　　結(jié)果：
　　1.各組細胞經(jīng)處理后，進行CCK-8實驗，發(fā)現(xiàn)實驗組EPCs的增殖能力較空白對照組及陰性對照組差(0.97±0.06 vs.1.20±0.11，P<0.01;0.97±0.06 vs.1.18±0.05, p<0.05

6、)且差異有統(tǒng)計學意義，而兩個對照組間差異無統(tǒng)計學意義（1.20±0.11 vs.1.18±0.05，P>0.5）。
　　2.各組細胞經(jīng)處理后，進行細胞分化實驗，發(fā)現(xiàn)實驗組分化的細胞（21.80±4.33）（紡錘樣）較空白對照組及陰性對照組（41.12±2.93，37.80±9.58）少且有統(tǒng)計學差異(21.80±4.33 vs.41.12±2.93, P<0.05;21.80±4.33 vs.37.80±9.58, P<0.05)

7、)，而兩個對照組間的差異無統(tǒng)計學意義(41.12±2.93 vs.37.80±9.58, P>0.5)；此外，統(tǒng)計分化細胞所占百分比發(fā)現(xiàn)，實驗組分化細胞百分比較空白對照組及陰性對照組低，差異有統(tǒng)計學意義（12.02±2.18 vs.17.78±1.81, P<0.01;12.02±2.18 vs.16.36±2.03, P<0.05），而空白對照組及陰性對照組之間相比差異無統(tǒng)計學意義（17.78±1.81 vs.16.36±2.03,P

8、>0.5）。
　　3.各組細胞經(jīng)處理后，進行細胞遷移實驗，發(fā)現(xiàn)實驗組的EPCs的遷移數(shù)目少于陰性對照組(50.35±15.48 vs.79.88±5.69, P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義，而實驗組與空白對照組之間以及空白對照組與陰性對照組之間的差異無統(tǒng)計學意義（50.35±15.48 vs72.40±6.24,P>0.5;72.40±6.24 vs.79.88±5.69,P>0.05）；
　　4.各組細胞經(jīng)處理后，進行細

9、粘附實驗，發(fā)現(xiàn)實驗組EPCs的粘附能力（62.90±6.43）較空白對照組（80.73±4.80）及陰性對照組(83.20±4.52)弱，差異有統(tǒng)計學意義（62.90±6.43vs.80.73±4.80,P<0.05;62.90±6.43 vs.83.20±4.52, P<0.01）。而空白對照組和陰性對照組之間相比差異無統(tǒng)計學意義（80.73±4.80 vs.83.20±4.52, P>0.5）。
　　結(jié)論：
　　本研究表