散血草乙醇提取物對(duì)小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究.pdf

1、目的:中藥用于腫瘤的輔助治療是目前一個(gè)新的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。散血草是一種常見(jiàn)的祖國(guó)傳統(tǒng)中草藥，應(yīng)用歷史悠久。本課題擬通過(guò)研究散血草乙醇提取物對(duì)體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞（EOMA細(xì)胞）生長(zhǎng)和凋亡的影響，探討其對(duì)于血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的可能影響，為散血草治療血管瘤奠定細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)及理論依據(jù)，為治療血管瘤提供新的方法。
　　方法:利用小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞株進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為陰性對(duì)照組:B1（單純PBS溶液處理）和不同濃度散血草乙醇提

2、取物干預(yù)組:B2（添加藥物為100μ g/mL的散血草乙醇提取物）、B3（添加藥物為1mg/mL的散血草乙醇提取物）三組。利用乙醇回流法獲得的散血草乙醇提取物，作為試驗(yàn)藥物。用散血草乙醇提取物干預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞。觀察比較三組體外培養(yǎng)的EOMA細(xì)胞在藥物作用下，干預(yù)24h、48h、72h后的細(xì)胞生長(zhǎng)情況。HE染色檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。Ki67標(biāo)記流式檢測(cè)三組細(xì)胞增殖情況;使用流式細(xì)胞術(shù)（AnnexinⅤ/PI染色法）測(cè)定不同濃度藥物作用后三組細(xì)

3、胞的凋亡情況; RT-PCR（半定量）檢測(cè)其VEGF mRNA表達(dá)情況。免疫熒光染色檢測(cè)各組細(xì)胞VEGFR蛋白的表達(dá)。所得數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，兩樣本均數(shù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);多個(gè)樣本兩兩比較先使用方差分析(ANOVA)后再使用多樣本兩兩比較中的SNK法進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS17.0軟件分析處理，設(shè)定P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:在干預(yù)后24h、48h、72h分別觀察各組EOMA細(xì)胞生

4、長(zhǎng)情況，見(jiàn)對(duì)照組血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，在72h就鋪滿2/3以上的培養(yǎng)瓶底部，呈貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞外形呈梭形，局部有克隆聚落形成。而散血草提取物干預(yù)組細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)緩慢、稀疏，聚落生長(zhǎng)不明顯，尤以1mg/mL組為甚。在干預(yù)后72h，正常對(duì)照組Ki67表達(dá)結(jié)果為160.13±4.57，100μg/mL加藥組表達(dá)結(jié)果為107.81±11.65，1mg/mL加藥組表達(dá)結(jié)果為37.41±1.16。在干預(yù)后第24、48、72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)上，100μ g/

5、ml藥物組和1mg/mL藥物組細(xì)胞Ki67平均熒光強(qiáng)度較對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);1mg/mL藥物組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度值較100μ g/ml藥物組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。在干預(yù)后72h，正常對(duì)照組細(xì)胞凋亡表達(dá)結(jié)果為2.15±0.22，100μg/mL加藥組表達(dá)結(jié)果為54.04±4.87，1mg/mL加藥組表達(dá)結(jié)果為77.95±2.93。在干預(yù)后第24、48、72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)上，100μ g/ml藥物組、1

6、mg/mL藥物組細(xì)胞凋亡率均較對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);1mg/mL藥物組細(xì)胞凋亡率較100μ g/ml藥物組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。在干預(yù)后72h，100μ g/ml藥物組、1mg/mL藥物組VEGFmRNA的表達(dá)較對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05);1mg/mL藥物組VEGFmRNA的表達(dá)又較100μg/ml藥物組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。在干預(yù)后72h各組細(xì)胞VEGFR