香煙提取物對小鼠內(nèi)皮祖細胞增殖能力及干細胞抗原-1表達的影響.pdf

1、目的:分離提取小鼠內(nèi)皮祖細胞，測定其表面干細胞抗原-1(Sca-1)的表達并觀察不同濃度香煙提取物(CSE)對內(nèi)皮祖細胞增殖能力和Sca-1表達的影響。
　　 方法:從12只健康4周雄性近交系SPF級C57BL/6J小鼠體內(nèi)取四肢長骨骨髓細胞培養(yǎng)，于第七天取出貼壁細胞做內(nèi)皮祖細胞鑒定并測定其細胞表面Sca-1表達情況。將內(nèi)皮祖細胞植入孔板中，分四組，用原培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)的為對照組;其余三組為低濃度組、中濃度組、高濃度組，分別用濃度

2、為1.0％，2.5％，5.0％的香煙提取物溶液干預。分別在干預后第3小時，第6小時，第24小時用MTT比色法測定活細胞數(shù)量。用Western Blot法測定對照組與CSE干預組Sca-1表達差異。
　　 結(jié)果:1、小鼠源性內(nèi)皮祖細胞在第七天貼壁后呈現(xiàn)類圓形、紡綞形、梭形或多邊形及“鋪路石”樣外觀。它們能攝取DiI-acLDL，胞漿呈紅色;與FITC-UEA-I連接，胞膜呈綠色，陽性率為55.30％。并能表達CD34、CD133、

3、和Flk-1陽性，CD34+CD133+、CD34+Flk-1+、CD34+ CD133+ Flk-1+陽性率分別為12.28％、0.098％、3.85％。2、MTT比色法測得對照組、低濃度組、中濃度組、高濃度組分別在3小時的OD值為（0.1404±0.0074）、(0.1900±0.0125)、（0.2137±0.0147）、（0.0158±0.0112）;6小時的OD值分別為(0.1444±0.0117)(0.1729±0.0132

4、)(0.0529±0.0156)（0.0054±0.0046）;24小時的OD值分別為（0.1580±0.0013）(0.0834±0.0158)（0.0169±0.0062）(0.0008±0.0011)。CSE干預組OD值均較空白對照組顯著降低（p均＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。且與對照組相比，各干預組OD值的變化與CSE之間存在濃度、時間依賴性。
　　 3、流式細胞術(shù)顯示內(nèi)皮祖細胞表達Sca-1的陽性率為98.87％。W