Musashi1基因表達(dá)對(duì)人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞放射增敏作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究以人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞株為模型，運(yùn)用RNA干擾技術(shù)，建立 Musashi1（Msi1）穩(wěn)定低表達(dá)的 HCT116細(xì)胞株，并接受放射線外照射，研究沉默Msi1對(duì)人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞株放射敏感性的影響，并初步探討其機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、應(yīng)用慢病毒載體，建立 Msi1低表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株（HCT116-Musashi1）及陰性對(duì)照組細(xì)胞株（HCT116-negative contro

2、l）。
　　2、通過克隆實(shí)驗(yàn)，測定沉默Msi1基因?qū)CT116細(xì)胞的放射敏感性的作用。
　　3、采用MTS法檢測，沉默組（Silence組）、空白組（Control組）、陰性對(duì)照組（NC組）細(xì)胞接受8Gy照射后的24h、48h、72h各組細(xì)胞的增殖活性及增殖抑制率。
　　4、采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測8Gy照射后的24h、48h、72h，沉默組（Silence組）、空白組（Control組）、陰性對(duì)照組（NC組）的細(xì)胞凋亡

3、比例，以及12Gy照射后48h三組細(xì)胞周期分布的變化。
　　結(jié)果：
　　1、通過克隆形成實(shí)驗(yàn)，根據(jù)單擊多靶模型擬合出生存曲線， Silence組的細(xì)胞放射敏感性明顯高于 NC組和 Control組，而 NC組與 Control組之間放射敏感性未見明顯差異。
　　2、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)研究顯示，與未照射組相比，8Gy劑量組中 Silence組，NC組，Control組在照射后24h、48h、72h，細(xì)胞增殖速率均減低，但 Si

4、lence組細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)的增殖活性均明顯低于 NC組和 Control組（P<0.001），而NC組和Control組之間未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。隨著時(shí)間增加，各組增殖抑制率逐步增加（P<0.001），呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，而Silence組的抑制率始終高于另外兩組（P<0.05），NC組和Control組之間未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　3、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明，8Gy照射后24h、48h、72h，Silence

5、組凋亡比例始終高于 NC組和 Control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），而 NC組和 Control組之間未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，并且隨著時(shí)間增加，三組細(xì)胞凋亡比例均增加（P<0.001），其中 Silence組在各時(shí)間點(diǎn)凋亡比例增加的程度始終高于另外兩組。
　　4、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明，12Gy照射后48h時(shí), Silence組細(xì)胞周期中G2/M期比例較Control組和NC組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<