羅格列酮對人結腸癌HT-29細胞氟尿嘧啶化療增敏作用實驗研究.pdf

1、目的：探討過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(peroxisomeproliferator-activated receptor gammar，ppary)配體羅格列酮(Rosiglitazone)對人結腸癌氟尿嘧啶化療增敏作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)人結腸癌HT-29細胞，分別或聯(lián)合應用不同濃度的羅格列酮、氟尿嘧啶(fluorouracil，5-Fu)處理人結腸癌細胞系(HT-29)細胞，MTT比色法測定藥物對細胞增殖抑制作用，臺

2、盼藍染色細胞計數(shù)法觀測藥物對HT-29細胞生長曲線的影響，PI染色流式細胞術(FCM)分析、吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)熒光染色法觀察細胞凋亡率。用Westernblot法檢測HT-29細胞PPARγ、NF-KB、Bcl-2、Bax的表達。初步探討羅格列酮對人結腸癌氟尿嘧啶化療增敏作用的分子機制。
　　 結果：(1)MTT比色法結果顯示5-Fu對HT-29細胞增殖具有抑制作用，其IC50為8.05μg/ml，羅格列酮對HT-2

3、9細胞增殖亦有抑制作用，其IC50為140.7μmol/L；無細胞毒濃度(1.0μ mol/L)羅格列酮能顯著增強5-Fu對HT-29細胞增殖抑制作用，聯(lián)合應用時IC50為1.66μg/ml。羅格列酮與5-Fu合用的CI值為0.218，CI小于1，表明羅格列酮和氟尿嘧啶合用具有協(xié)同作用。(2)臺盼藍染色細胞計數(shù)法顯示：羅格列酮抑制體外培養(yǎng)的HT-29細胞生長，且呈明顯的劑量-時間依賴方式；1.0、10.0μmol/L羅格列酮對HT-29

4、細胞無顯著毒性作用(IR<10％)，其與5-Fu合用時能增強5-Fu對HT-29細胞生長抑制作用；與細胞計數(shù)繪制生長曲線結果一致。無細胞毒濃度1.0μmol/L羅格列酮能夠顯著增強6.0μg/ml5-Fu對HT-29細胞的生長抑制，使HT-29細胞群體倍增時間延長至900小時，比DMSO對照組延長15倍。(3)AO/EB熒光雙染色法和流式細胞術結果顯示：5-Fu能明顯誘導HT-29細胞凋亡，呈劑量依賴性。3.0，6.0，12.0μmol

5、/mL處理HT-29細胞72h，細胞凋亡率分別為13.91％，18.16％，23.14％，羅格列酮亦能誘導HT-29細胞凋亡，呈劑量依賴性。1.0，10.0，100.0μmol/L羅格列酮處理HT-29細胞72h后，細胞凋亡率分別為1.44％，2.34％，14.13％。無細胞毒濃度的羅格列酮能顯著促進5-Fu誘導HT-29細胞凋亡。1.0μmol/L羅格列酮與12.0μg/ml5-Fu合用使HT-29細胞凋亡率高達48.41％。(4)W

6、erstern blot法結果顯示HT-29細胞表達PPARγ，羅格列酮作用HT-29細胞后上調PPARγ和Bax蛋白的表達，下調NF-κB、Bcl-2蛋白的表達，且呈濃度依賴性(P<0.05)。
　　 結論：(1)無細胞毒濃度下(1.0μmol/L)羅格列酮能增強5-Fu對HT-29細胞的生長增殖抑制作用。(2)無細胞毒濃度下(1.0μmol/L)羅格列酮能促進5-Fu誘導HT-29細胞凋亡。(3)羅格列酮的化療增敏作用可能與