RhoB基因表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察脂質(zhì)體介導(dǎo)的RhoB轉(zhuǎn)染對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的影響,為結(jié)腸癌的臨床治療提供新的思路。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:本實(shí)驗(yàn)以人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)共分五組:RhoB蛋白過表達(dá)組(pcDNA4-RhoB組)及其陰性對(duì)照組(pcDNA4-EGFP組),RhoB蛋白干擾組(pGenesil-1-RhoB組)及其陰性對(duì)照組(pGenesil-1-HK組),空白對(duì)照組(HCT116組)。將質(zhì)粒(pcDNA4-Rho

2、B、pcDNA4-EGFP、pGenesil-1-RhoB、pGenesil-1-HK)通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入HCT116細(xì)胞中,通過熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果并計(jì)算轉(zhuǎn)染效率;通過Western-Blot免疫印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞中RhoB蛋白的表達(dá),MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,顯示脂質(zhì)體成功將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染平均效率約為82.4%(2)We

3、stern-Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中RhoB蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示:pcDN&-RhoB組RhoB蛋白的表達(dá)明顯高于其他組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。pGenesil-1-RhoB組RhoB蛋白表達(dá)與HCT116組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(3)MTT法結(jié)果顯示:從第二天開始,與pcDNA4-EGFP組和HCT116組相比,pcDNA4-RhoB組細(xì)胞增殖明顯受抑制,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4)細(xì)胞凋亡結(jié)