溫度培養(yǎng)皿及SF-PLCL電紡膜培養(yǎng)結(jié)膜上皮的研究.pdf

1、第一部分：溫度敏感性培養(yǎng)皿培養(yǎng)結(jié)膜上皮膜片的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探討以溫度敏感性培養(yǎng)皿為載體培養(yǎng)結(jié)膜上皮細(xì)胞構(gòu)建含杯狀細(xì)胞的復(fù)層結(jié)膜上皮膜片的可行性。
　　方法：1．分離和培養(yǎng)兔結(jié)膜上皮細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)染色、PAS染色、鬼筆環(huán)肽染色鑒定細(xì)胞。
　　2.通過降低培養(yǎng)溫度獲得結(jié)膜上皮細(xì)胞膜片，并檢測(cè)結(jié)膜上皮細(xì)胞膜片的細(xì)胞活性和基因表達(dá)。
　　3.組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)膜上皮細(xì)胞膜片的結(jié)構(gòu)和表型。
　　

2、結(jié)果：1.培養(yǎng)的結(jié)膜細(xì)胞表達(dá) CK4，CK19，MUC5AC；PAS染色顯示少部分細(xì)胞中糖元表達(dá)陽性；鬼筆環(huán)肽染色顯示典型的結(jié)膜上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。
　　2.結(jié)膜上皮細(xì)胞在溫度敏感性培養(yǎng)皿上增殖良好，其中杯狀細(xì)胞占細(xì)胞比例大約為25.3％±1.34%。
　　3.溫度敏感性培養(yǎng)皿培養(yǎng)的結(jié)膜上皮膜片由4-5層分化良好的細(xì)胞層組成，結(jié)構(gòu)和兔結(jié)膜上皮相似。
　　結(jié)論：以溫度敏感性培養(yǎng)皿為載體可以用來培養(yǎng)含有杯狀細(xì)胞和活性

3、細(xì)胞的復(fù)層結(jié)膜上皮膜片。
　　第二部分：SF/PLCL電紡膜為載體構(gòu)建結(jié)膜上皮層的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探究以SF/PLCL電紡膜為載體體外培養(yǎng)結(jié)膜上皮細(xì)胞構(gòu)建結(jié)膜上皮層的可行性。
　　方法：1.分離和培養(yǎng)兔結(jié)膜上皮細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)染色、PAS染色、鬼筆環(huán)肽染色鑒定細(xì)胞。
　　2.應(yīng)用靜電紡絲技術(shù)制成質(zhì)量比為25:75（SF：PLCL）的納米電紡絲膜。檢測(cè)其表面形態(tài)及纖維直徑，親水角，機(jī)械性能。
　　3．將

4、細(xì)胞種到SF/PLCL電紡膜上，檢測(cè) SF/PLCL電紡膜的細(xì)胞相容性。體外培養(yǎng)1周后，將復(fù)合物植入裸鼠背部培養(yǎng)2周，初步觀察復(fù)合體的組織學(xué)情況。
　　結(jié)果：1.培養(yǎng)的結(jié)膜細(xì)胞表達(dá)CK4，CK19，MUC5AC；PAS染色顯示少部分細(xì)胞中糖元表達(dá)陽性；鬼筆環(huán)肽染色顯示典型的結(jié)膜上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。
　　2．SF/PLCL電紡膜表面光滑，纖維直徑均勻，多孔狀結(jié)構(gòu)，具有良好的機(jī)械性能。結(jié)膜上皮細(xì)胞在電紡絲膜表面粘附良好，電