拓撲結(jié)構(gòu)條件下肝細胞增殖、PI3K-Akt信號表達及相關(guān)培養(yǎng)皿的設(shè)計與制備.pdf

1、利用聚二甲基硅氧烷（PDMS）制備了4-4μm、10-4μm，名義高度為4μm的微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底和平面基底，研究PDMS微柱陣列型拓撲結(jié)構(gòu)基底上PI3K/AKT信號通路并以磷脂酰肌醇3-激酶特異性抑制劑 LY294002處理對HepG2肝癌細胞增殖活力的影響，并探討其可能的作用機制。采用掃描電鏡以及相差顯微圖像觀察細胞的形態(tài)；MTT法檢測結(jié)構(gòu)基底和平面基底上培養(yǎng)HepG2肝癌細胞增殖活力，流式細胞儀分析細胞周期；定量PCR技術(shù)檢測

2、bax、bcl-2、p21 mRNA表達；免疫熒光法檢測HepG2細胞粘著斑蛋白、Akt蛋白及PIP2的表達。實驗結(jié)果表明，在4-4μm、10-4μm兩種基底上細胞細胞呈單層鋪展而不形成聚集體，且在拓撲結(jié)構(gòu)表面維持良好的粘附、鋪展、和細胞極化程度，且其增殖活力均顯著高于平面基底上相應(yīng)值；LY294002抑制劑作用下微拓撲結(jié)構(gòu)和平面基底上細胞增殖抑制率均明顯增高或趨于增高，且在拓撲結(jié)構(gòu)基底上的細胞增殖抑制率顯著高于PDMS平面基底上相應(yīng)值

3、，相應(yīng)的，流式細胞儀檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)拓撲結(jié)構(gòu)基底上的細胞增殖指數(shù)均顯著高于平面基底相應(yīng)值，LY294002處理HepG2細胞24 h后G0/G1期細胞相對增加,相應(yīng)地，增殖指數(shù)也顯著下降，引起了細胞凋亡；實時定量PCR實驗表明4-4μm、10-4μm基底上HepG2細胞增殖相關(guān)蛋白p21、bcl-2 mRNA表達量較之平面基底上mRNA表達量均出現(xiàn)明顯增高或趨于增高，且10-4μm拓撲結(jié)構(gòu)基底上p21 mRNA表達量最高，bax mRN