拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)條件下肝細(xì)胞增殖、PI3K-Akt信號表達(dá)及相關(guān)培養(yǎng)皿的設(shè)計與制備.pdf

1、利用聚二甲基硅氧烷（PDMS）制備了4-4μm、10-4μm，名義高度為4μm的微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底和平面基底，研究PDMS微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上PI3K/AKT信號通路并以磷脂酰肌醇3-激酶特異性抑制劑 LY294002處理對HepG2肝癌細(xì)胞增殖活力的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。采用掃描電鏡以及相差顯微圖像觀察細(xì)胞的形態(tài)；MTT法檢測結(jié)構(gòu)基底和平面基底上培養(yǎng)HepG2肝癌細(xì)胞增殖活力，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期；定量PCR技術(shù)檢測

2、bax、bcl-2、p21 mRNA表達(dá)；免疫熒光法檢測HepG2細(xì)胞粘著斑蛋白、Akt蛋白及PIP2的表達(dá)。實驗結(jié)果表明，在4-4μm、10-4μm兩種基底上細(xì)胞細(xì)胞呈單層鋪展而不形成聚集體，且在拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)表面維持良好的粘附、鋪展、和細(xì)胞極化程度，且其增殖活力均顯著高于平面基底上相應(yīng)值；LY294002抑制劑作用下微拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和平面基底上細(xì)胞增殖抑制率均明顯增高或趨于增高，且在拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上的細(xì)胞增殖抑制率顯著高于PDMS平面基底上相應(yīng)值

3、，相應(yīng)的，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上的細(xì)胞增殖指數(shù)均顯著高于平面基底相應(yīng)值，LY294002處理HepG2細(xì)胞24 h后G0/G1期細(xì)胞相對增加,相應(yīng)地，增殖指數(shù)也顯著下降，引起了細(xì)胞凋亡；實時定量PCR實驗表明4-4μm、10-4μm基底上HepG2細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白p21、bcl-2 mRNA表達(dá)量較之平面基底上mRNA表達(dá)量均出現(xiàn)明顯增高或趨于增高，且10-4μm拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上p21 mRNA表達(dá)量最高，bax mRN