體外培養(yǎng)人Malassez上皮剩余細胞及鑒定.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)人牙周膜內(nèi)Malassez上皮剩余細胞，探討一種簡便、原代培養(yǎng)成功率高、可重復性好的細胞培養(yǎng)方法，為進一步在體外研究Malassez上皮剩余細胞的生物學特性及功能提供實驗條件。
　　 方法：選取12～25歲青少年因正畸拔除的前磨牙，采用組織塊培養(yǎng)法和酶消化法進行牙周膜細胞原代培養(yǎng)。先使用含血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，當細胞融合達50%左右時，對Malassez上皮剩余細胞進行選擇性培養(yǎng)，按比例逐漸減少培養(yǎng)液中血清含量

2、，同時增加細胞生長所需的因子，直到完全使用無血清培養(yǎng)基。采用形態(tài)學觀察、免疫組化方法鑒定其來源，并繪制生長曲線。
　　 結(jié)果：⑴分離下的牙周膜，在經(jīng)過初期含血清培養(yǎng)基的組織塊培養(yǎng)后，5-16天可見組織塊周圍有細胞爬出，大部分是成纖維細胞，細胞形態(tài)呈長梭形，其間有部分多角形或“鋪路石”樣細胞，為上皮細胞，胞漿均勻，輪廓清晰。⑵酶消化法培養(yǎng)的牙周膜細胞，在12小時后即有細胞的貼壁變形，2-3天后大部分細胞貼壁生長，所得細胞大部分也是

3、成纖維細胞，含少量上皮細胞，成纖維細胞和上皮細胞的形態(tài)學特征與組織塊法培養(yǎng)的相似。⑶經(jīng)過12-24天牙周膜細胞原代培養(yǎng)，細胞融合可達50%左右，加入無血清培養(yǎng)基后，可見成纖維細胞的生長受到明顯抑制，其數(shù)量逐漸減少，而上皮細胞在適應無血清環(huán)境后數(shù)量逐漸增加。⑷經(jīng)波形絲蛋白、細胞角蛋白AE1/AE3及CK14免疫組化染色鑒定，原代培養(yǎng)的細胞為上皮來源，無間充質(zhì)細胞混雜，符合人牙周膜上皮細胞的形態(tài)學特征和生物學特性。
　　 結(jié)論：①采