鼓膜上皮干細胞的定位特征和培養(yǎng)研究.pdf

1、第一部分:不同類型大鼠鼓膜穿孔的自然修復 目的:研究大鼠鼓膜不同類型穿孔的自然修復過程,探討鼓膜穿孔的修復機制.方法:50只(100耳)大鼠鼓膜,隨機分5組,分別作①鼓膜緊張部中央2.5mm穿孔、②鼓膜緊張部中央1mm小穿孔、③緊張部后方邊緣性穿孔、④緊張部3/4切除后鉻酸燒灼錘骨柄、⑤松弛部中央1.5mm穿孔,第一組中8耳穿孔愈合后作第二次穿孔,光鏡下觀察鼓膜穿孔修復的組織改變.結(jié)論:鼓膜緊張部的穿孔修復依賴于上皮細胞的移行,細胞的增

2、殖中心位于鼓環(huán)和錘骨柄,中耳手術對鼓環(huán)和錘骨柄的保護有重要的意義.第二部分:鼓膜上皮干細胞的分布——鼓膜上皮角蛋白19和β<,1>整合素的表達 目的:觀察鼓膜上皮中表皮干細胞標志角蛋白19和β<,1>整合素的分布,以確定上皮干細胞在鼓膜上的分布,鼓膜穿孔后干細胞的變化.材料和方法:4只剛斷奶大鼠和4只成年大鼠作正常鼓膜觀察,另28只成年大鼠作鼓膜緊張部中央2mm穿孔.于穿孔后5小時、第1、2、3、4和第6天,以及穿孔愈合后3天取鼓膜標本

3、,固定脫鈣后,冰凍切片,層厚7um,進行β<,1>整合素和角蛋白19免疫組化檢測.β<,1>整合素免疫組化檢測用三步法(SABC),角蛋白19(cytokeratin 19)免疫組化檢測用兩步法(Envision).透射電鏡觀察正常鼓膜的鼓環(huán).結(jié)論:干細胞在鼓膜緊張部主要分布在鼓環(huán)和錘骨柄區(qū)域,在緊張部的中央沒有干細胞.穿孔的修復是通過干細胞的細胞分裂,增生的細胞向穿孔邊緣移行修復穿孔.中耳手術應注意保護含有上皮干細胞的鼓環(huán)和錘骨柄區(qū)域

4、.第三部分:鼓膜上皮干細胞培養(yǎng) 目的:該實驗觀察鼓膜上皮不同部位的生長特點,鼓膜上皮干細胞的生長特征,建立鼓膜干細胞體外培養(yǎng)和增殖的方法.材料和方法:30個大鼠鼓膜,鼓室粘膜面用絲裂霉素C損傷粘膜細胞和部分纖維細胞.沿鼓環(huán)和錘骨柄一周將鼓膜緊張部中央切下,錘骨柄上皮與鼓環(huán)上皮放在一起,將組織分成鼓環(huán)和緊張部兩部分在胰酶中冷消化16小時,用尼龍篩網(wǎng)過濾.在添加了高EGF和低鈣等營養(yǎng)劑的Medium 154培養(yǎng)基中培養(yǎng).比較鼓環(huán)和緊張部兩處