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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本課題擬研究“連翹、天花粉蛋白、黨參、香加皮”中有效成分組成的“連花參加”方逆轉(zhuǎn)化學(xué)致癌劑4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)誘導(dǎo)小鼠(C57BL/6)食管癌前病變的效果及潛在的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。
方法:
1選取300只C57BL小鼠動(dòng)物模型,按隨機(jī)原則分為6組,分別為空白對(duì)照組(A1組)(不做任何處理)30只;甲基纖維素對(duì)照組(A2組)30只,給予甲基纖維素灌胃
2、,不給藥;誘癌劑組(B組),治療組(C組),預(yù)防組(D組),全反式維甲酸陽(yáng)性對(duì)照組(E組),用滅菌水配制成100μg/ml濃度,采取正常飲水法給B、C、D、E四組小鼠。受試藥“連花參加”方的配制方法為連翹脂素(2mg)∶天花粉蛋白(1.4mg)∶香加皮三萜類(lèi)化合物(1.4mg)∶黨參蛋白(0.7mg),按此比例混合溶于1.5%的甲基纖維素,定容20ml。D組在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始就給與中藥方劑“連花參加”方灌胃。C組第15周開(kāi)始給予中藥方劑“連花參
3、加”方灌胃,E組也在15周進(jìn)行“全反式維甲酸(ATRA)”灌胃。C、D、E組小鼠每周均灌胃三次,每次0.1ml。
2該實(shí)驗(yàn)從第12周時(shí)分別把A1、A2、B、D組小鼠處死5只,觀察結(jié)果顯示小鼠食管未出現(xiàn)不典型增生。在15周時(shí),與12周采取同樣的處理,HE染色結(jié)果顯示小鼠食管發(fā)現(xiàn)早期不典型增生。從15周開(kāi)始,將B組、C組、D組、E組100μg/ml4NQO水溶液統(tǒng)一更換為滅菌水。第18、21周,A1、A2組各處死5只,B、C、D、
4、E組各處死15只,第24周時(shí),處死剩余小鼠,均為斷頸處死。
3建立小鼠癌前病變的模型,HE檢測(cè)B組不同時(shí)期組織的病理學(xué)變化,鑒定腫瘤進(jìn)展的階段。
4提取小鼠脾細(xì)胞,觀察用藥前后對(duì)脾細(xì)胞中淋巴細(xì)胞的影響。用流式細(xì)胞法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞中CD4+,CD8+,B7-H4(B7homologue4),CD4+CD25+foxp3+等T細(xì)胞及其表面分子在不同時(shí)間點(diǎn)的組間變化情況。
結(jié)果:
1成功建立了小鼠食管癌
5、癌前病變的模型,HE染色發(fā)現(xiàn)第15周時(shí)4NQO誘癌組的小鼠開(kāi)始有輕度不典型增生。并且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),病變程度逐漸加深。
2通過(guò)HE染色結(jié)果顯示,小鼠食管組織病變程度在24周時(shí),有顯著性差異,P<0.05,C、D、E組的致癌率比B組顯著降低,P<0.05,說(shuō)明“連花參加”方可減緩食管癌病變的進(jìn)程。
3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在18周和21周時(shí)各組間CD4+CD25+foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占脾淋巴細(xì)胞的百分率表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;
6、在24周時(shí)各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。
4 B7-H4在CD4+上的表達(dá)率在21周和24周時(shí)出現(xiàn)顯著性差異,P<0.05。B7-H4在CD8+T細(xì)胞和CD4+CD25+foxp3+T細(xì)胞上的表達(dá)率在18周、21周和24周時(shí)均無(wú)顯著性差異。
結(jié)論:
1成功建立了小鼠食管癌前病變動(dòng)物模型。
2“連花參加”方通過(guò)抑制Treg細(xì)胞在脾淋巴細(xì)胞上的表達(dá)和B7-H4在CD4+T細(xì)胞的表達(dá),促進(jìn)了機(jī)體抗腫
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