川續(xù)斷總皂苷抗骨質(zhì)疏松研究及緩釋骨架微丸的制備工藝研究.pdf

1、川續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asper Wall.ex Henry的干燥根。其主要分布為中國(guó)的江西、湖北、湖南、廣西、四川等地。因續(xù)斷可以“續(xù)折接骨”而得名。續(xù)斷性微溫，味苦辛，入肝、腎經(jīng)。秋季采挖，去掉根頭和須根，用微火烘至半干，堆置“發(fā)汗”至內(nèi)部變墨綠色時(shí)，再烘至近干。川續(xù)斷化學(xué)成分復(fù)雜而多樣化，主要包括皂苷類(lèi)（三萜皂苷類(lèi)）、環(huán)烯醚萜類(lèi)、生物堿類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)等其他成分。川續(xù)斷做為骨傷科和婦科常用中藥，臨床上主要應(yīng)用于腰

2、膝酸軟，風(fēng)濕痹痛，跌打損傷，崩漏，胎漏?，F(xiàn)代藥理學(xué)證明，川續(xù)斷具抗骨質(zhì)疏松、促進(jìn)骨傷愈合、有抗炎、抗衰老、抗早產(chǎn)、流產(chǎn)、等藥理作用。
　　本文以川續(xù)斷總皂苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，首先建立兩個(gè)指標(biāo)含量測(cè)定的方法。供試品加入新配制的5％香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，密塞搖勻。置于60℃水浴20min后停止反應(yīng)，取出后立即放入冰水浴中冷卻，然后精密加入冰醋酸10ml，搖勻。于540nm處測(cè)定其吸光度從而計(jì)算川續(xù)斷

3、總皂苷的含量。實(shí)驗(yàn)選定甲醇濃度、超聲時(shí)間、溶媒比為三個(gè)主要因素，以川續(xù)斷總皂苷的含量與川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量的綜合評(píng)分為最終評(píng)價(jià)指標(biāo)，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，優(yōu)選了川續(xù)斷總皂苷的提取工藝，即為加10倍量75%的甲醇超聲提取兩次，每次30min。驗(yàn)證試驗(yàn)顯示三批川續(xù)斷總皂苷的含量RSD值為1.12%，川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量RSD值為0.62%，結(jié)果表明所得最佳提取工藝簡(jiǎn)便可行。
　　實(shí)驗(yàn)將提取的總皂苷粗提液首先依次用石油醚和水飽和正丁醇萃取，然后考察

4、了D101大孔樹(shù)脂對(duì)總皂苷的純化工藝，最終確定最佳純化工藝為：上樣濃度0.2g/ml（生藥）按2BV/h濕法上樣，上樣量為1BV，最終用6BV、70%乙醇以1BV/h的流速洗脫。三批驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果總皂苷純度平均值為59.86%，RSD值0.64%；總皂苷轉(zhuǎn)移率平均值為83.35%，RSD值1.05%，表明確定的最佳工藝穩(wěn)定，能用于川續(xù)斷總皂苷的分離純化。
　　本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了川續(xù)斷藥材中4中目標(biāo)成分含量，結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ、馬錢(qián)苷、齊墩果

5、酸和熊果酸的含量平均值依次為66.327、2.240、0.157、0.564 mg/g。實(shí)驗(yàn)還建立了70%乙醇洗脫部位的 HPLC指紋圖譜，結(jié)果匹配的峰中有13個(gè)共有峰，所有共有峰在20～50min內(nèi)出峰，峰型基線(xiàn)平穩(wěn)，各峰能實(shí)現(xiàn)良好的分離，10批川續(xù)斷總皂苷純化液相似度均大于0.9，表明10批川續(xù)斷總皂苷純化液指紋圖譜相似度良好，在川續(xù)斷總皂苷純化液的質(zhì)量控制方面具有一定的參考意義。
　　實(shí)驗(yàn)考察了川續(xù)斷總皂苷的抗骨質(zhì)疏松作用，

6、考察了川續(xù)斷總皂苷對(duì)成骨細(xì)胞增值的影響、對(duì)ALP活性的影響和OPG及RANKL mRNA表達(dá)的影響，結(jié)果低中高劑量組對(duì)三個(gè)指標(biāo)均表現(xiàn)出一定程度的促進(jìn)作用。續(xù)斷總皂苷作用于成骨細(xì)胞24、48h，中高劑量組對(duì)成骨細(xì)胞增殖均有顯著性作用（P＜0.05，P＜0.01），72h時(shí)，中劑量組續(xù)斷總皂苷對(duì)成骨細(xì)胞有顯著性增殖作用（P＜0.05）；各時(shí)間段的低劑量組對(duì)成骨細(xì)胞也表現(xiàn)出一定的增值作用但并沒(méi)有顯著性差異；與對(duì)照組比較，低中高濃度的續(xù)斷總皂苷

7、對(duì)大鼠成骨細(xì)胞ALP活性均有促進(jìn)作用，隨著濃度的增加，促進(jìn)作用增強(qiáng)。其中中高劑量組促進(jìn)作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；續(xù)斷總皂苷對(duì)OPGmRNA的表達(dá)有促進(jìn)作用，低中劑量組促進(jìn)作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；同時(shí)續(xù)斷總皂苷可抑制RANKLmRNA的表達(dá)，隨著濃度增加其抑制作用增強(qiáng)，且低中高劑量組的抑制作用均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）， OPG/RANKL值升高。
　　實(shí)驗(yàn)以總皂苷純化液干粉為主藥，以微晶纖維素