NG2在肝癌中的表達(dá)以及與患者預(yù)后相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性肝癌是一種非常常見(jiàn)的惡性腫瘤，在中國(guó)的發(fā)病率和死亡率已成為世界上最高的，據(jù)估計(jì)全世界每年有55％的新增病例和死亡。肝癌是包括指原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌，而發(fā)病機(jī)制尚未明確的原發(fā)性肝癌有更高的發(fā)病率和致死率，因此對(duì)人類(lèi)健康造成很大的危害。全球肝癌發(fā)病率存在著地區(qū)差異。經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的一些亞洲、非洲地區(qū)，發(fā)病率極高。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)的肝癌病人數(shù)約占全世界的50％。目前肝癌的治療方案主要取決于疾病的分期、殘余肝功能及患者身體狀況

2、。手術(shù)治療對(duì)于早期肝癌是最好的治療方法。然而，由于絕大多數(shù)肝癌患者在肝癌早期階段并無(wú)明顯的臨床表現(xiàn)，因而未引起患者的足夠重視，等至肝癌確診時(shí)腫瘤已發(fā)生擴(kuò)散或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。而即使經(jīng)過(guò)了手術(shù)治療患者的5年生存率也不到35％。為了改善患者的術(shù)后預(yù)后和生活質(zhì)量，關(guān)鍵是尋找一個(gè)與肝癌進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)并影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　NG2是一種硫酸軟骨素蛋白多糖(chondroitin sulphatepeote

3、oglycan，CSPG)，存在于許多祖細(xì)胞表面具有完整跨膜結(jié)構(gòu)的Ⅰ型跨膜蛋白。雖然在人類(lèi)的正常組織中有表達(dá)，但表達(dá)量微乎其微，然而在胰腺癌、惡性黑色素瘤、胃癌、大腸癌等許多人類(lèi)癌癥和軟組織肉瘤、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤和髓系白血病中都普遍存在過(guò)度表達(dá)的現(xiàn)象。另外，NG2在皮膚的鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞樣乳腺癌的腫瘤干細(xì)胞中表達(dá)，這說(shuō)明NG2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)。雖然NG2并非癌基因，但在癌基因相關(guān)的信號(hào)通路中，NG2可以發(fā)揮激活信

4、號(hào)通路、連接信號(hào)分子的作用。例如，NG2可以調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附于膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分從而為腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移提供成熟的微環(huán)境。在惡性分化細(xì)胞、祖細(xì)胞及各種腫瘤干細(xì)胞的細(xì)胞膜上均有NG2高表達(dá)，而且NG2在這些細(xì)胞生長(zhǎng)，遷移過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。在正常成人的大腦組織內(nèi)，雖然僅有5％的神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)NG2，但卻具有廣泛的解剖分布，在循環(huán)系統(tǒng)，超過(guò)70％祖細(xì)胞高度表達(dá)NG2。在神經(jīng)系統(tǒng)的NG2+細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖和自我更新能力，無(wú)論

5、在正常情況還是在病理?xiàng)l件下均能分化為不同類(lèi)型的神經(jīng)細(xì)胞。目前尚無(wú)確切研究表明肝癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制中是否有NG2分子的參與。因此，本研究將探討NG2在肝癌組織中的表達(dá)情況，分析其與肝癌的臨床病理指標(biāo)、復(fù)發(fā)和生存率是否具有相關(guān)性，以及它是否可以作為一種有效的臨床預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，為其臨床診療、預(yù)后判斷提供更多的一些依據(jù)。
　　目的:
　　采用IHC、RT-PCR、WB方法從蛋白和mRNA水平檢測(cè)NG2蛋白的表達(dá)水平，探討在肝癌中

6、NG2的表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性以及NG2在肝癌患者預(yù)后評(píng)估中的作用和意義。
　　方法:
　　1.根據(jù)免疫組化染色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目以及染色強(qiáng)度對(duì)NG2的表達(dá)量進(jìn)行半定量分析，采用免疫組化染色的方法對(duì)132例肝癌標(biāo)本以及96例癌旁組織標(biāo)本的NG2蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析。為了確定免疫組化的染色結(jié)果，采用qRT-PCR和Western blot對(duì)肝癌和癌旁組織中的NG2蛋白表達(dá)進(jìn)一步分析驗(yàn)證;
　　2.NG2蛋白表達(dá)量與

7、肝癌臨床病理參數(shù)相關(guān)性的分析采用卡方檢驗(yàn)，NG2表達(dá)量與肝癌患者生存率的相關(guān)性采用Kaplan-Meier法分析并用log-rank檢測(cè);
　　3.為了進(jìn)一步確認(rèn)NG2評(píng)價(jià)作用，采用Cox多元線(xiàn)性回歸分析所有涉及的臨床病理指標(biāo)，評(píng)估其對(duì)肝癌患者總體生存和無(wú)瘤生存率的影響。
　　結(jié)果:
　　1.根據(jù)分析發(fā)現(xiàn)在肝癌標(biāo)本中高表達(dá)NG2蛋白者占據(jù)所有肝癌標(biāo)本的63.6％(84/132)然而癌旁組織標(biāo)本中高表達(dá)NG2蛋白者占據(jù)所

8、有癌旁標(biāo)本的28.1％(27/96)。NG2蛋白在肝癌中的表達(dá)量顯著高于癌旁組織具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0001)。
　　2.采用卡方檢驗(yàn)或者Fisher確切概率法檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達(dá)量與腫瘤的分化程度(X2value=9.436，p=0.0089)，是否復(fù)發(fā)(X2value=5.769，p=0.0163)，TNM分期(X2value=8.976，p=0.0027)，以及有無(wú)血管侵襲(X2value=5

9、.476，p=0.0193)密切相關(guān)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而分析發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達(dá)量與年齡、性別、腫瘤大小、血清AFP水平、腫瘤大小以及腫瘤有無(wú)包膜沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)性。log-rank檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中NG2蛋白的表達(dá)量與肝癌患者的生存率有統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。高表達(dá)NG2蛋白的肝癌患者其總體生存率要顯著低于低表達(dá)NG2蛋白的肝癌患者(29.2％ vs9.5％，p＜0.001)。而且，高表達(dá)NG2蛋白的肝癌患者

10、其無(wú)瘤生存率要顯著低于低表達(dá)NG2蛋白的肝癌患者(15.2％vs6.7％，p＜0.001)。
　　3.Cox多元線(xiàn)性回歸發(fā)現(xiàn)NG2表達(dá)量(HR=2.035，p=0.002)，血清AFP水平(HR=1.903，p=0.003)，TNM分期(HR=2.039，p=0.001)，以及有無(wú)血管侵襲(HR=1.938，p=0.002)是影響肝癌患者總體生存率(0S)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。與此同時(shí)，NG2表達(dá)量(HR=1.974，p=0.003)，血

11、清AFP水平(HR=1.767，p=0.008)，TNM分期(HR=2.078，p=0.001)，腫瘤有無(wú)包膜(HR=0.652，p=0.045)，以及有無(wú)血管侵襲(HR=1.941，p=0.002)是影響肝癌患者無(wú)瘤生存率(DFS)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論:
　　1.經(jīng)過(guò)免疫組化、western blot、以及PCR分析發(fā)現(xiàn)NG2在肝癌中的表達(dá)量顯著高于癌旁組織具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;
　　2.NG2在肝癌中的表達(dá)量與腫瘤