中藥芡實(shí)對(duì)糖尿病腎病大鼠蛋白尿的降低作用及其化學(xué)成分研究.pdf

1、中草藥芡實(shí)（Euryale ferox）屬于睡蓮科（Nymphaeaceae）芡屬下的唯一品種，因其果實(shí)上的花萼成熟退化后形如雞喙，遂有“雞頭米”之稱(chēng)。芡實(shí)，最早記錄源自于《神農(nóng)本草經(jīng)》，因其味甘、澀，中醫(yī)將其歸于腎、脾二經(jīng)。芡實(shí)具有補(bǔ)脾固腎、澀精止帶、開(kāi)胃止瀉的功效，民間自古亦有煮食芡實(shí)粥的習(xí)俗，因此芡實(shí)可謂一種“藥食同源”的天然補(bǔ)品。本文以芡實(shí)種仁為研究對(duì)象，針對(duì)其醇提物和水提物中的化學(xué)成分進(jìn)行研究，并驗(yàn)證芡實(shí)醇提物具有降低糖尿病腎

2、病導(dǎo)致的蛋白尿的效果。
　　本文對(duì)芡實(shí)的主要研究過(guò)程和結(jié)果包括以下幾個(gè)方面:
　　1、采用不同濃度的乙醇和丙酮作為提取溶劑，在45℃水浴條件下，加熱提取兩次，根據(jù)所得提取率結(jié)合后續(xù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)酚類(lèi)物質(zhì)的含量，選擇80％乙醇作為后續(xù)提取溶劑，并進(jìn)行大量提取。揮干溶劑后將藥渣進(jìn)行水提醇沉，制備沉淀和上清。
　　2、對(duì)芡實(shí)醇提物、水提物上清和沉淀分別進(jìn)行體外抗氧化能力的測(cè)定，結(jié)果顯示芡實(shí)醇提物和水提物上清均有一定的抗氧化能力，當(dāng)

3、醇提物濃度達(dá)到0.6、0.8、1.0mg/ml時(shí)其還原能力較強(qiáng)且能夠明顯清除超氧陰離子自由基、羥自由基和DPPH自由基。
　　3、選擇18-22g昆明小鼠進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，以20g/kg作為給藥濃度，給藥容積為0.8ml/只，連續(xù)給藥兩次后，觀察14d內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡，結(jié)果表明芡實(shí)醇提物20g/kg以?xún)?nèi)的給藥劑量為安全劑量。
　　4、SD大鼠150±20g，分為正常組、手術(shù)組和非手術(shù)組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，手術(shù)組預(yù)先進(jìn)行單側(cè)腎切除術(shù)，待傷口

4、恢復(fù)后，與非手術(shù)組共同腹腔注射60mg/kg STZ建立糖尿病腎病模型，造模成功后連續(xù)灌胃給予不同濃度的芡實(shí)醇提物（75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg）12周，每隔四周收集一次尿液檢測(cè)24h尿蛋白和尿微量白蛋白，處死后收集血清檢測(cè)血糖、Scr、BUN、TC和TG。并以HE染色做病理切片考察腎臟病理學(xué)改變。結(jié)果顯示，中(300mg/kg)、高(600mg/kg)劑量的芡實(shí)醇提物能夠明顯降低尿蛋白和尿微量白

5、蛋白的水平，緩解腎臟損傷進(jìn)程。
　　5、分別利用福林酚法、香草醛-冰乙酸-高氯酸法、苯酚-硫酸法和間羥基聯(lián)苯法聯(lián)合校正方法測(cè)定芡實(shí)醇提物組分中酚類(lèi)物質(zhì)、萜類(lèi)物質(zhì)和糖苷類(lèi)物質(zhì)的含量。結(jié)果顯示芡實(shí)醇提物種三者的含量為27.3％、22.4％和26.0％，認(rèn)為類(lèi)酚類(lèi)和萜類(lèi)物質(zhì)為醇提物中所含的主要成分。
　　6、采用UPLC聯(lián)合MS技術(shù)分析芡實(shí)醇提物粗品中化學(xué)成分的組成，鑒定出10個(gè)主要成分，其可能的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別是:沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酸

6、乙酯、5，7，3'，4'，5'-五羥基二氫黃酮、5，7，4'-三羥基二氫黃酮、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、異落葉松樹(shù)酯醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、沒(méi)食子酰葡萄糖苷、原花青素、多羥基氧雜蒽酮和單寧酸。
　　7、對(duì)芡實(shí)醇提物、水提物上清和水提物沉淀三個(gè)組分分別進(jìn)行單糖組成和分子量分布的考察，結(jié)果表明三種成分中的單糖組成都以葡萄糖為主;醇提物以小分子化合物為主，分子量主要集中在2500以下;水提物上清主要以2500以下的小分子糖為主，沉淀