維生素D受體對(duì)糖尿病腎病小鼠蛋白尿的影響.pdf

1、背景：糖尿病腎病(DN)已成為終末期腎病的主要病因。蛋白尿是DN患者最突出的臨床表現(xiàn)。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚無(wú)有效的治療方法。目前國(guó)際上主要觀點(diǎn)認(rèn)為:DN是一種―足細(xì)胞病。維生素D受體（VDR）廣泛分布于人體，包括骨骼、腎臟、皮膚、甲狀旁腺、乳腺等體內(nèi)多數(shù)組織、器官。維生素D（VD）-VDR信號(hào)系統(tǒng)具有調(diào)控基因表達(dá)、鈣磷代謝、細(xì)胞遷移和分化、免疫反應(yīng)等多種作用。有研究報(bào)道VDR在長(zhǎng)期慢性腎臟疾病、終末期腎臟病及長(zhǎng)期糖尿病導(dǎo)致的微炎癥狀態(tài)

2、的患者體內(nèi)有表達(dá)量減少的趨勢(shì)；利用VDRA（維生素D受體激動(dòng)劑，vitaminD receptor agonist）可部分緩解DN動(dòng)物模型的蛋白尿等等。但是關(guān)于VDR與糖尿病腎病蛋白尿之間的關(guān)系，相關(guān)研究較少。Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與機(jī)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化等多個(gè)生理過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)VD-VDR信號(hào)系統(tǒng)對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)作用。對(duì)于Wnt信號(hào)通路及其關(guān)鍵分子GSK-3β/β-catenin，未見(jiàn)有關(guān)

3、VDR在DN中對(duì)其調(diào)控的相關(guān)報(bào)道。
　　目的：⑴在糖尿病腎病模型db/db小鼠中檢測(cè)腎組織中VDR的表達(dá)水平及與蛋白尿量的關(guān)系；⑵在小鼠腎組織中驗(yàn)證 VDR對(duì) Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵分子 GSK-3β、β-catenin的調(diào)控作用；⑶利用VDR激動(dòng)劑帕立骨化醇觀察VDR在動(dòng)物模型中對(duì)高糖導(dǎo)致的足細(xì)胞和腎損傷的保護(hù)作用。
　　方法：隨機(jī)將5周齡db/db小鼠分為3組：db/db組，db/db-二甲基亞砜組（db/db-D組），db

4、/db-帕立骨化醇治療組（db/db-P組），每組各20只；db/m小鼠20只作為正常對(duì)照組（n=20）。從6周起開(kāi)始收集血、尿標(biāo)本，檢測(cè)血糖、血肌酐、尿蛋白量，與db/m小鼠的相應(yīng)數(shù)據(jù)對(duì)比。于10周時(shí)作如下藥物干預(yù)：db/db-P組隔日給予帕立骨化醇0.3μg/kg腹腔注射，db/db-D組注射與db/db-P組等體積的溶劑，db/m組和db/db組不給予任何處理。分別于注射前、注射后1月、2月、3月時(shí)（即10周、14周、18周、22

5、周）每組各處死5只，取腎組織實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）、Wetern blot檢測(cè)VDR、nephrin、podocin、GSK-3β、β-catenin、α-SMA、MMP9的表達(dá)量；并制備病理和電鏡切片，觀察腎組織結(jié)構(gòu)的變化及足細(xì)胞的形態(tài)，免疫組化檢測(cè) nephrin、β-catenin的表達(dá)；免疫熒光檢測(cè)VDR、podocin、α-SMA的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴隨周齡增加，db/db小鼠體重、血糖、尿蛋白及血肌酐明顯

6、升高（P<0.05），給予帕立骨化醇治療后尿蛋白、血肌酐水平降低（P<0.05），而對(duì)體重、血糖無(wú)明顯影響。腎組織中VDR的蛋白和mRNA表達(dá)量下調(diào)（P<0.05），Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)VDR和尿蛋白呈負(fù)相關(guān)（r=-0.745，P<0.01）。⑵隨周齡增加，db/db小鼠腎組織中 VDR的蛋白和mRNA表達(dá)量減少（P<0.05），GSK-3β、β-catenin的蛋白和mRNA表達(dá)增多（P<0.05）；給予帕立骨化醇后，VDR的蛋

7、白和mRNA表達(dá)量上調(diào)，GSK-3β、β-catenin的蛋白和mRNA表達(dá)量減少（P<0.05），說(shuō)明VDR對(duì)Wnt信號(hào)通路關(guān)鍵分子GSK-3β、β-catenin有調(diào)控作用。⑶隨周齡增加，db/db小鼠腎組織中nephrin、podocin的蛋白和mRNA表達(dá)量減少（P<0.05），而α-SMA、MMP9的蛋白和mRNA表達(dá)增多（P<0.05），給予帕立骨化醇激動(dòng) VDR后 nephrin、podocin的蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào)（P