參麥注射液及其活性成分對缺血再灌注后心肌細胞的影響.pdf

1、目的:
　　1、明確參麥注射液改善心肌缺血再灌注損傷是否通過調(diào)節(jié)鈣調(diào)蛋白Phospholamban(PLB)的表達和磷酸化水平來改善細胞內(nèi)鈣濃度的機理;2、探討人參皂苷對缺血心臟的心功能的改善作用及可能的鈣相關的機理;3、比較參麥注射液復方制劑是否優(yōu)于人參皂苷單純制劑。
　　方法:
　　利用新生大鼠原代心肌細胞建立缺氧/復氧（I/R）模型，實驗分為正常培養(yǎng)組(N)、正常培養(yǎng)+參麥組(N+SM)、正常培養(yǎng)+人參總皂苷組(

2、N+TSPG)、正常培養(yǎng)+人參皂苷Rg1組(N+Rg1)、缺氧/復氧組（I/R）、缺氧/復氧組+參麥組（I/R+SM）、缺氧/復氧組+人參總皂苷組(I/R+TSPG)、缺氧/復氧+人參皂苷Rg1組(I/R+Rg1)，采用流式細胞儀測定凋亡細胞百分率、細胞內(nèi)鈣的平均熒光值，實時熒光定量聚合酶式反應(RT-PCR)法測定心肌細胞肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA)和PLB的mRNA表達量，Western Blot法測定心肌細胞SERCA和PLB、磷酸化

3、PLB(p-PLB)的蛋白表達量。
　　結果:
　　心肌細胞缺氧/復氧后，PLB mRNA及蛋白表達無顯著變化，p-PLB蛋白表達和SERCA的mRNA及蛋白表達均有不同程度的下降，而I/R+Rg1組較I/R組上述變化無明顯差異(P＞0.05)，I/R+SM組p-PLB蛋白表達、p-PLB/PLB、SERCAmRNA及蛋白表達均明顯升高(P＜0.01)，PLB/SERCA明顯下降(P＜0.01)，I/R+TSPG組SERCA

4、 mRNA及蛋白表達均明顯升高(P＜0.01)，PLB/SERCA明顯下降(P＜0.05)，p-PLB蛋白表達、p-PLB/PLB無明顯差異(P＞0.05)。I/R+SM組較I/R+TSPG組SERCA mRNA及蛋白表達明顯升高(P＜0.05)、PLB/SERCA明顯降低(P＜0.05)。I/R+SM組較I/R組凋亡細胞百分率均有不同程度下降(P＜0.05)，I/R+SM組較I/R組細胞內(nèi)鈣的平均熒光值均有不同程度的降低(P＜0.01

5、)，I/R+TSPG組、I/R+Rg1組細胞凋亡率變化無明顯差異(P＞0.05)，I/R+TSPG組細胞內(nèi)鈣離子濃度較I/R升高(P＜0.05)，I/R+Rg1無明顯變化。
　　結論:
　　1、參麥注射液能通過調(diào)節(jié)鈣調(diào)蛋白PLB的磷酸化水平來改善細胞內(nèi)鈣濃度的機理來改善心肌缺血再灌注損傷;2、人參總皂苷可抑制缺血再灌注后心肌細胞內(nèi)鈣離子濃度，進而改善心功能，此過程可能跟促進SERCA表達有關，但不通過鈣調(diào)蛋白PLB磷酸化途徑