參麥注射液及其活性成分對缺血再灌注后心肌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　1、明確參麥注射液改善心肌缺血再灌注損傷是否通過調(diào)節(jié)鈣調(diào)蛋白Phospholamban(PLB)的表達(dá)和磷酸化水平來改善細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的機(jī)理;2、探討人參皂苷對缺血心臟的心功能的改善作用及可能的鈣相關(guān)的機(jī)理;3、比較參麥注射液復(fù)方制劑是否優(yōu)于人參皂苷單純制劑。
　　方法:
　　利用新生大鼠原代心肌細(xì)胞建立缺氧/復(fù)氧（I/R）模型，實(shí)驗(yàn)分為正常培養(yǎng)組(N)、正常培養(yǎng)+參麥組(N+SM)、正常培養(yǎng)+人參總皂苷組(

2、N+TSPG)、正常培養(yǎng)+人參皂苷Rg1組(N+Rg1)、缺氧/復(fù)氧組（I/R）、缺氧/復(fù)氧組+參麥組（I/R+SM）、缺氧/復(fù)氧組+人參總皂苷組(I/R+TSPG)、缺氧/復(fù)氧+人參皂苷Rg1組(I/R+Rg1)，采用流式細(xì)胞儀測定凋亡細(xì)胞百分率、細(xì)胞內(nèi)鈣的平均熒光值，實(shí)時熒光定量聚合酶式反應(yīng)(RT-PCR)法測定心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA)和PLB的mRNA表達(dá)量，Western Blot法測定心肌細(xì)胞SERCA和PLB、磷酸化

3、PLB(p-PLB)的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后，PLB mRNA及蛋白表達(dá)無顯著變化，p-PLB蛋白表達(dá)和SERCA的mRNA及蛋白表達(dá)均有不同程度的下降，而I/R+Rg1組較I/R組上述變化無明顯差異(P＞0.05)，I/R+SM組p-PLB蛋白表達(dá)、p-PLB/PLB、SERCAmRNA及蛋白表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)，PLB/SERCA明顯下降(P＜0.01)，I/R+TSPG組SERCA

4、 mRNA及蛋白表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)，PLB/SERCA明顯下降(P＜0.05)，p-PLB蛋白表達(dá)、p-PLB/PLB無明顯差異(P＞0.05)。I/R+SM組較I/R+TSPG組SERCA mRNA及蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)、PLB/SERCA明顯降低(P＜0.05)。I/R+SM組較I/R組凋亡細(xì)胞百分率均有不同程度下降(P＜0.05)，I/R+SM組較I/R組細(xì)胞內(nèi)鈣的平均熒光值均有不同程度的降低(P＜0.01

5、)，I/R+TSPG組、I/R+Rg1組細(xì)胞凋亡率變化無明顯差異(P＞0.05)，I/R+TSPG組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較I/R升高(P＜0.05)，I/R+Rg1無明顯變化。
　　結(jié)論:
　　1、參麥注射液能通過調(diào)節(jié)鈣調(diào)蛋白PLB的磷酸化水平來改善細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的機(jī)理來改善心肌缺血再灌注損傷;2、人參總皂苷可抑制缺血再灌注后心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，進(jìn)而改善心功能，此過程可能跟促進(jìn)SERCA表達(dá)有關(guān)，但不通過鈣調(diào)蛋白PLB磷酸化途徑