NT5C2在兒童急性白血病中的作用及耐藥機(jī)制初步研究.pdf

1、第一部分 NT5C2在兒童急性白血病中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：探討核苷類似物代謝相關(guān)基因NT5C2在兒童急性白血病中的表達(dá)及其臨床意義。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR）和免疫組織化學(xué)方法檢測NT5C2在63例初診、15例完全緩解、7例復(fù)發(fā)兒童急性白血病患兒骨髓樣本的mRNA及蛋白水平，16例非增殖性疾病免疫性血小板減少性紫癜患兒作為對照。統(tǒng)計(jì)分析 NT5C2在兒童

2、AL各組中的表達(dá)差異及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.NT5C2 mRNA在初診急性B淋巴白血?。˙-ALL）、急性T淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL）、急性髓細(xì)胞白血病（AML）和ITP對照組的表達(dá)量分別為[1.16（0.89-2.25）]、[0.96（0.74-1.25）]、[1.66（0.84-3.15）]、[0.88（0.61-1.21）]。其中AML（P<0.01）、B-ALL（P<0.05）的表達(dá)水平顯著高于對照組；T-

3、ALL表達(dá)水平與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。動態(tài)觀察NT5C2 mRNA在15例AL患兒不同治療階段的表達(dá)變化，完全緩解后的NT5C2 mRNA水平低于初診時(shí)（P<0.01）。復(fù)發(fā)AL的NT5C2 mRNA水平顯著高于緩解組及對照組（P＜0.01）。
　　2.免疫組織化學(xué)結(jié)果與熒光定量PCR結(jié)果具有相同趨勢。
　　3.AML中NT5C2高表達(dá)與預(yù)后不良的染色體異常狀態(tài)（r=0.45, P＜0.05）、高危危險(xiǎn)度分

4、層（r=0.43, P＜0.05）呈正相關(guān)；在B-ALL（r=0.38, P=0.07）、T-ALL(r=0.39, P＜0.05）中NT5C2高表達(dá)與高危危險(xiǎn)度分層呈正相關(guān)。
　　4.AML患兒在化療過程中，誘導(dǎo)緩解化療D9（33.3％vs0 P＜0.05）和D28(25.0%vs0 P＜0.05）骨髓不緩解在高表達(dá)組所占比例高于低表達(dá)組；微小殘留病（MRD）陽性率（36.4%vs14.3%P＞0.05）和復(fù)發(fā)率(38.5%vs

5、28.6%P＞0.05）在高表達(dá)組高于低表達(dá)組，但無顯著性差異。
　　結(jié)論：1.NT5C2在急性白血病初診和復(fù)發(fā)時(shí)高表達(dá)，完全緩解后顯著降低，提示NT5C2可能在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。
　　2.初診時(shí)NT5C2高表達(dá)與急性白血病的部分危險(xiǎn)因素呈正相關(guān)，并且與AML治療反應(yīng)差相關(guān)。
　　3.NT5C2可能參與核苷類似物耐藥，有望成為指導(dǎo)個(gè)體化化療、判斷預(yù)后、監(jiān)測復(fù)發(fā)的新指標(biāo)。
　　第二部分 NT5C2參與白血病化療耐藥

6、機(jī)制的初步研究
　　目的:探討 NT5C2基因是否通過參與核苷類似物代謝而發(fā)揮耐藥作用，該基因表達(dá)下調(diào)能否提高白血病細(xì)胞Jurkat的化療敏感性。
　　方法:遞增濃度化療藥作用于Jurkat細(xì)胞，熒光定量PCR和Western Blot分別檢測 NT5C2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化趨勢；NT5C2-siRNA重組慢病毒轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞使NT5C2表達(dá)下調(diào)，化療藥干預(yù)后流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；在化療藥作用下，CCK-

7、8法檢測NT5C2表達(dá)水平不同的Jurkat細(xì)胞的增殖活力。
　　結(jié)果:1.遞增濃度化療藥作用于Jurkat細(xì)胞24h后，隨著核苷類似物化療藥araC、6-MP濃度的升高，NT5C2所表達(dá)mRNA和蛋白水平均逐漸升高（P均<0.05）。
　　2.在araC、6-MP分別作用24h后，NT5C2表達(dá)下調(diào)的Jurkat細(xì)胞凋亡率增加(P均<0.05)。
　　3.在遞增濃度araC、6-MP分別作用下，NT5C2表達(dá)下調(diào)的J