Livin、Smac mRNA在急性白血病中的表達(dá)及意義.pdf

1、細(xì)胞凋亡是一種由基因控制的自主性有序死亡,對(duì)保持組織的健康和正常生長(zhǎng)有十分重要意義.細(xì)胞凋亡受抑,將導(dǎo)致細(xì)胞生存期延長(zhǎng),有利于轉(zhuǎn)化突變的細(xì)胞生長(zhǎng)積聚,最終可致腫瘤的產(chǎn)生.細(xì)胞凋亡受細(xì)胞內(nèi)源性基因、酶類和信號(hào)傳導(dǎo)途徑的調(diào)控.目前發(fā)現(xiàn)機(jī)體內(nèi)存在兩類影響細(xì)胞凋亡的基因,即促凋亡基因如Reaper、Smac/DIABLO、HtrA2和抗凋亡基因如Bcl-2、P53、CrmA及IAPs.IAPs是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有抗凋亡作用的蛋白分子,其特殊的分子

2、結(jié)構(gòu)及強(qiáng)大的抑制細(xì)胞凋亡功能正日益引起人們的關(guān)注.lAPs主要通過(guò)抑制胱天蛋白酶(caspases)抑制凋亡.目前IAPs家族共發(fā)現(xiàn)XIAP、c-lAPl、c-IAP2、NAIP、Livin、Apollon、Survivin、ILP-2八個(gè)成員.Livin(KIAP/ML-IAP)于2000年發(fā)現(xiàn),是IAPs家族中的最新成員.人類的Livin基因位于染色體20q13.3,全長(zhǎng)46kb,包含7個(gè)外顯子及6個(gè)內(nèi)含子.Livin在N端含有一個(gè)

3、高度保守的長(zhǎng)約70個(gè)氨基酸的桿狀病毒IAP重復(fù)序列(baculovims IAP repeat,BIR),此結(jié)構(gòu)域是結(jié)合和抑制胱天蛋白酶的關(guān)鍵部位,也是與Smac相互結(jié)合的關(guān)鍵部位;C端含有一個(gè)RING環(huán)指結(jié)構(gòu)(ring finger), 該結(jié)構(gòu)域具有E<,3>泛素連接酶活性,在其促進(jìn)自身泛素化及Smac泛素化過(guò)程中起著關(guān)鍵作用.Livin轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物因剪接方式不同有兩種mRNA亞型Livin a和Livin B,分別編碼298和280個(gè)氨

4、基酸的蛋白質(zhì).Livin在胚胎組織中存在,在胎兒發(fā)育過(guò)程中多種組織高表達(dá),可能與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān),在正常成人的大多數(shù)終末組織中(除胎盤)低表達(dá)或不表達(dá),而在黑色素瘤、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá).目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)Livin在白血病中的研究多局限于細(xì)胞系,而Livin在白血病原代細(xì)胞中表達(dá)情況鮮有報(bào)道.Smac即第2個(gè)線粒體衍生的胱天蛋白酶激活劑(second mitochondria-deriveddactivator of

5、caspase,Smac),又稱DIABLO(direct IAP binding protein with lowPL),是一種線粒體促凋亡蛋白,其基因定位于12q24.當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),與細(xì)胞色素C-同釋放到胞漿中,通過(guò)與IAP家族成員相互結(jié)合,解除IAP對(duì)caspase-9、3、7等的抑制作用,激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),促進(jìn)細(xì)胞凋亡.Smac在人類睪丸、心、肝、腎等多種組織中表達(dá),在胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌等腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)

6、.國(guó)內(nèi)有人報(bào)道Smac在急性白血病中伴隨c-IAP1、c-IAP2、Survivin高表達(dá),但Livin與Smae在急性白血病中的相互關(guān)系尚無(wú)報(bào)道.本研究旨在檢測(cè)Livin、Smae在急性白血病中的表達(dá)及意義以及兩者之間的關(guān)系.材料與方法: 1研究對(duì)象為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2006年1月-12月初發(fā)急性白血病(acute leukemia,AL)患者52例,正常對(duì)照組為10名骨髓涂片大至正常的非惡性血液病患者(NC),并用HL-60細(xì)胞

7、作為陽(yáng)性對(duì)照. 2應(yīng)用RT-PCR方法追蹤檢測(cè)觀察52例急性白血病(AL)患者治療前(新診斷組)、緩解后(緩解組)及復(fù)發(fā)后(復(fù)發(fā)組)Livin、Smac mRNA的表達(dá)情況. 3應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.采用卡方檢驗(yàn)(包括Fisher's精確概率檢驗(yàn))分析Livin、Smac mRNA在急性白血病初治組、緩解組、復(fù)發(fā)組以及正常對(duì)照組中的表達(dá)有無(wú)差異,分析新診斷組Livin、Smac表達(dá)率高低與臨床療效

8、的關(guān)系;采用2×2列聯(lián)表分析Livin、Smac表達(dá)水平有無(wú)相關(guān)性.P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)果: 1:Livin mRNA在AL細(xì)胞中的表達(dá)在新診斷的AL患者52例中,Livin的陽(yáng)性率為40.3﹪(21/52);在正常對(duì)照組中的表達(dá)率為0.0﹪(10例全部陰性);新診斷組陽(yáng)性表達(dá)率高于正常對(duì)照組x<'2>=4.437,P=-0.035).在28例緩解組中,Livin mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為0﹪(0/28),表達(dá)率較新

9、診斷組降低,差異具有顯著性x<'2>=15.332,P=0.000).復(fù)發(fā)組的陽(yáng)性率為50.0﹪(3/6),較新診斷組高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義x<'2>=0.000,P=0.988);較緩解組及正常對(duì)照組均明顯升高,差別具有顯著性(p均小于0.05).急性髓系白血病(AML)患者組陽(yáng)性表達(dá)率為42.1﹪,高于急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者陽(yáng)性表達(dá)率35.7﹪,但兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常對(duì)照組(P值均小

10、于0.05). 2 Smac mRNA在AL細(xì)胞中的表達(dá)SmacmRNA在新診斷AL組中陽(yáng)性率為59.6﹪(31/52),高于正常對(duì)照組中的表達(dá)率10.0﹪(1/10),差別具有顯著性(x<'2>=6.400,P=0.011).在28例緩解組中,Smac mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為14.2﹪(4/28),低于新診斷組,差異具有顯著性(x<'2>=15.196,P=0.000).復(fù)發(fā)組的陽(yáng)性率為60.7﹪(4/6),較新診斷組高,但無(wú)

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=0.000,P=1.000);較緩解組及正常對(duì)照組均明顯升高,差別具有顯著性(P均小于0.05).急性髓系白血病(AML)患者組陽(yáng)性表達(dá)率為60.5﹪,高于急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者陽(yáng)性表達(dá)率57.1﹪,但兩組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常對(duì)照組,差異具有顯著性(P值均小于0.05). 3 Livin、Smae tuRNA表達(dá)相關(guān)性分析52例患者中Livin和Smae雙

12、陽(yáng)性患者16例(30.8﹪),雙陰性患者16例(30.8﹪),LIvin+/Smac-或Livin-/Smae+患者20例(38.4﹪).應(yīng)用2×2列聯(lián)表對(duì)Livin和SmaemRNA在初治52例AL患者中的表達(dá)進(jìn)行的關(guān)聯(lián)性分析,發(fā)現(xiàn)兩者的表達(dá)具有關(guān)聯(lián)性(x<'2>=4.020,P=0.045);Pearson列聯(lián)系數(shù)=0.267. 4 Livin和Smae mRNA的表達(dá)與緩解率的關(guān)系44例可進(jìn)行療效評(píng)估的患者中,Livin

13、rnRNA表達(dá)陰性者完全緩解率為76.9﹪(20/28),明顯高于表達(dá)陽(yáng)性患者的完全緩解率38.9﹪(7/18)(x<'2>=4.785,P=-0.029).Smac陰性患者完全緩解率為85.7﹪(12/1.4),明顯高于表達(dá)陽(yáng)性者完全緩解率50.0﹪(x<'2>=5.135,P=0.023).14例雙陰性患者完全緩解率為100﹪(14/14),明顯高于表達(dá)雙陽(yáng)性患者的完全緩解率40.0﹪(6/15)(Fisher's檢驗(yàn),P=0.01

14、7). 結(jié)論: 1 新診斷急性白血病患者Livin mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組,隨治療達(dá)完全緩解后其表達(dá)水平下降,復(fù)發(fā)后表達(dá)又升高,提示Livin參與急性白血病的發(fā)生與發(fā)展;Livin mRNA陽(yáng)性表達(dá)的急性白血病患者完全緩解率低于陰性表達(dá)的患者,提示Livin高表達(dá)是急性白血病不良預(yù)后指標(biāo). 2 新診斷急性白血病患者促凋亡蛋白Smac表達(dá)水平也明顯高正常對(duì)照組,治療緩解后表達(dá)下降,復(fù)發(fā)后表達(dá)又升高,變化規(guī)律