中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶對(duì)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞粘蛋白MUC5AC表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　肝內(nèi)大膽管過度分泌粘液所導(dǎo)致的慢性增生性膽管炎是肝膽管結(jié)石的形成過程中的主要致病因素。組織學(xué)上，肝膽管結(jié)石病肝中的膽管壁內(nèi)和膽管周圍腺體均呈明顯的增生性病理改變，其分泌的粘液排放到膽管的內(nèi)表面形成了一個(gè)捕捉鈣鹽脂質(zhì)的成石微環(huán)境。粘蛋白是膽管粘液和結(jié)石基質(zhì)的重要成分，其中MUC5AC是膽管上皮分泌的最主要的粘蛋白，其在膽石病患者中明顯高表達(dá)。因此，闡明影響膽管上皮粘蛋白合成調(diào)控機(jī)制及其影響因素，對(duì)于肝膽管結(jié)石病的預(yù)防和治

2、療具有重要意義。
　　粘蛋白是一種廣泛分布于人體組織及粘膜表面的粘液的主要成分，在體內(nèi)主要起潤(rùn)滑，保護(hù)粘膜及免疫調(diào)節(jié)等作用，正常生理?xiàng)l件下構(gòu)成人體必不可少的生理屏障。研究發(fā)現(xiàn)粘蛋白MUC5AC在正常肝內(nèi)膽管組織中幾乎無表達(dá)。
　　中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(Neutrophil elastase，NE)屬于絲氨酸蛋白酶的胰凝乳蛋白酶家族，成熟的中性粒細(xì)胞中并無NE的表達(dá)，生理?xiàng)l件下NE與其抑制劑保持平衡構(gòu)成機(jī)體防御系統(tǒng)的重要部分，

3、在受到炎癥，毒素、細(xì)菌(LPS)等有害物質(zhì)侵犯時(shí)，NE的大量釋放可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，增加組織通透性，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的滲出及向炎癥部位趨化集中，釋放IL-8等炎癥因子。有研究已經(jīng)表明在呼吸道上皮中，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)可通過ROS、細(xì)胞因子等多種途徑刺激組織粘蛋白的過度表達(dá)，其中以MUC5AC最為主要。但是目前NE在肝內(nèi)膽管結(jié)石形成中的作用及其在粘蛋白MUC5AC表達(dá)中的調(diào)節(jié)作用尚不明確。
　　本課題擬檢測(cè)MUC5AC在肝內(nèi)

4、膽管結(jié)石病肝組織中的表達(dá)及NE對(duì)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞粘蛋白MUC5AC表達(dá)達(dá)影響。
　　方法：
　　1、肝內(nèi)膽管結(jié)石患者肝臟組織中粘蛋白MUC5AC的表達(dá)
　　收集我院2008年01月至2013年12月肝內(nèi)膽管結(jié)石患者及正常肝臟（肝破裂患者）肝臟組織病理標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化方法測(cè)定兩組患者肝臟組織中粘蛋白MUC5AC的表達(dá)。
　　2、.NE誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞MUC5AC表達(dá)的改變
　　以NE(50ng/ml

5、)刺激人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，12h后Realtime-PCR方法檢測(cè)MUC5AC mRNA水平，24h后Western blot檢測(cè)MUC5AC蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　1、肝內(nèi)膽管結(jié)石患者肝臟組織中的粘蛋白MUC5AC表達(dá)顯著高于正常肝臟組織。
　　2、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)可誘導(dǎo)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞MUC5AC高表達(dá)。
　　以NE(50ng/ml)刺激人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，12h時(shí)MUC5AC mRNA表達(dá)