SEC3對中性粒細胞彈性蛋白酶誘導氣道上皮細胞黏蛋白分泌的影響.pdf

1、目的:
　　探討栓鏈因子復合物亞基Sec3對中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)誘導的氣道上皮細胞黏蛋白分泌的影響。
　　方法:
　　1、體外培養(yǎng)人氣道上皮細胞16HBE，隨機分為8組:
　　A組:空白對照組;
　　B組:AG1487（表皮生長因子受體磷酸化抑制劑）組;
　　C組:Sec3 siRNA組:
　　D組:陰性siRNA對照組;
　　E組:NE組;
　　F組:NE+AG1478;<

2、br>　　G組:NE+ Sec3 siRNA組;
　　H組:NE+陰性siRNA組;
　　2、以中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)作為刺激因素，構建黏液高分泌模型，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、逆轉錄-聚合酶鏈反應(rt-PCR)分析受刺激組和對照組MUC5AC的轉錄和分泌水平， Western印跡法分析磷酸化表皮生長因子受體(p-EGFR)水平。
　　3、以AG1487作為抑制，阻遏表皮生長因子受體信號通路，采用

3、Western-blot法檢測抑制組和對照組磷酸化EGFR水平，驗證AG1487的抑制效應，并分析比較抑制組和對照組黏蛋白的表達情況。
　　4、用Sec3-siRNA-pLKO.1 lentiviral載體轉染Sec3 siRNA，以抑制Sec3功能，采用Western-blot法檢測轉染組和對照組Sec3水平，確認其轉染成功后，分析轉染組和對照組在中性粒細胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC轉錄和胞外分泌水平的變化。
　　結果

4、:
　　1、中性粒細胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC的轉錄（E組:0.75±0.05）和胞外分泌水平(E組:0.80±0.09)顯著提高，(p＜0.01)，相應，表皮生長因子受體的磷酸化水平（E組:0.87±0.12）也明顯增加(p＜0.01)。
　　2、加入表皮生長因子受體磷酸化抑制劑后，p-EGFR水平下降(F組:0.13±0.06)(p＜0.01)，中性粒細胞彈性蛋白酶的刺激作用受到抑制，MUC5AC轉錄水平(F組:0

5、.38±0.06)較未受抑制組(E組:0.75±0.05)顯著下降(p＜0.01)，分泌水平（F組:0.32±0.08）也隨之降低(p＜0.01)。
　　3、轉染Sec3 siRNA后，隨著Sec3蛋白表達的下降(G組:0.11±0.06)(p＜0.01)，MUC5AC的胞外分泌水平（G組:0.36±0.09）也顯著降低(p＜0.01)，但其轉錄水平（G組:0.72±0.04）并未受到影響(p＞0.05)。
　　結論: