中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶在實驗性肝損傷中的作用.pdf

1、【目的】 探討中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)在刀豆球蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用及其機(jī)制，分析NE與腫瘤壞死因子-α(TNF-α)間的相互關(guān)系，探討 NE與實驗動物肝組織細(xì)胞內(nèi)所發(fā)生氧化應(yīng)激水平間的聯(lián)系。 【方法】 SPF級雄性KM小鼠72只，用均勻順序隨機(jī)法將動物分為三組，模型組、對照組和NE抑制組。靜脈注射Con A(20mg/kg)制作小鼠急性肝損傷模型，NE抑制組于制作模型前1h靜脈予NE抑制

2、劑西維來司鈉(10mg/kg)，其后按1次/4h用藥。于實驗的第2h、8h分批采集小鼠血液和肝組織標(biāo)本，觀測動物8h內(nèi)死亡率。用HE染色法觀察肝組織損傷病理變化，高倍鏡(×400)下計數(shù)浸潤于肝組織中的中性粒細(xì)胞，自動生化分析儀測定實驗小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平；采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測實驗小鼠2h肝組織勻漿中NE、TNF-α水平；利用比色法檢測肝組織勻漿液中MPO的含量。 【結(jié)果】 1、小鼠肝組織勻

3、漿中NE水平 三組小鼠肝組織勻漿中NE水平不同，各組NE含量：模型組(67.70±20.07)ng/mg 蛋白；NE 抑制組(53.60±17.31)ng/mg 蛋白；對照組(26.25±7.12)ng/mg 蛋白，NE 在三組中的含量差異有顯著性意義(P<0.01)，兩兩比較，模型組含量均高于其它兩組(P<0.01)。 2、小鼠肝組織勻漿中TNF-α水平 三組小鼠肝組織勻漿中TNF-α水平不同，各組 TNF-α

4、含量：模型組(127.14±31.46)pg/ mg蛋白；NE 抑制組(101.57±27.14)pg/ mg 蛋白；對照組(23.56±6.02)pg/mg 蛋白。TNF-α在三組中的含量差異有顯著性意義(P<0.01)，兩兩比較，模型組含量均高于其它兩組(P<0.01)。 3、各組血清ALT水平的比較 在應(yīng)用Con A后ALT水平有明顯升高。各實驗組小鼠血清ALT水平比較差異有顯著性意義(P<0.01)。模型組血清A

5、LT水平明顯高于NE抑制組(P<0.01)。 4、肝組織中性粒細(xì)胞計數(shù) 對2h和8h時肝臟的病理切片進(jìn)行高倍鏡下中性粒細(xì)胞計數(shù)，各時間點(diǎn)三組間比較差異均有顯著性意義(P<0.001)，兩兩比較，各兩組間差異均有顯著性意義(P<0.01)，以模型組最高。 5、各組動物肝組織MPO含量 各組動物2h時肝組織勻漿中MPO含量分別為：模型組(2.88±0.25)U/L，NE抑制組(2.04±0.21)U/L，對照

6、組(0.84±0.04)U/L。肝組織中MPO的含量在三組間比較差異有顯著性意義(P<0.001)。兩兩比較，每兩組間差異均有顯著性意義(P<0.01)，以模型組最高。 6、各觀測指標(biāo)間相關(guān)性分析 (1)肝組織中 NE、TNF-α的含量成正相關(guān)(r=0.731，P<0.01)。 (2)肝組織中NE和 TNF-α含量與血清ALT水平均成正相關(guān)(r=0.767，P<0.01:r=0.658，P<0.01)。

7、(3)中性粒細(xì)胞計數(shù)與血清ALT水平、肝組織NE、TNF-α含量均成正相關(guān)(r=0.652，P<0.01；t=0.829，P<0.01；r=0.704，P<0.01)。 (4)肝組織MPO含量與肝組織NE水平及血清ALT水平成正相關(guān)(r=0.793，P<0.01:r=0.507，P<0.01)。 7、各組間肝臟指數(shù)的比較 用Con A后各組動物肝指數(shù)有不同程度的增高，組間肝臟指數(shù)比較差異有顯著性意義(P<0.00

8、1)，其中模型組動物肝臟指數(shù)明顯高于其它兩組(P<0.01)。 8、各組動物8h內(nèi)死亡率的比較 三組動物8h內(nèi)的死亡率比較差異有顯著性意義(P<0.001)，其中模型組的動物8h內(nèi)的死亡率(45.8％)明顯高于NE抑制組(16.7％)，差異有顯著性意義(P<0.05)；NE 抑制組高于對照組，差異有顯著性意義(P<0.05)。 【結(jié)論】 1、NE在ConA誘導(dǎo)的肝損傷中可能發(fā)揮著重要的致?lián)p傷作用；NE在中