Cyr61在缺血預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　Cyr61是一種肝素綁定，富含半胱氨酸的分泌性多肽，是立早基因家族的重要一員。目前研究證實(shí)，Cyr61為一種新型的促血管生成因子，純化的Cyr61可以上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA和蛋白的表達(dá)，有利于缺血心肌組織中微血管的新生及側(cè)支循環(huán)的建立，減輕心肌缺血-再灌注損傷，對(duì)心肌細(xì)胞起保護(hù)作用。而Cyr61發(fā)揮心肌保護(hù)作用的具體作用機(jī)制尚不清楚。有研究表明，細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERKs)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是促進(jìn)細(xì)胞存活、抑制細(xì)胞凋

2、亡的重要細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，并且介導(dǎo)缺血預(yù)適應(yīng)的心臟保護(hù)功能，但是在缺血預(yù)適應(yīng)減輕心肌細(xì)胞損傷中ERKs是否參與Cyr61的活化，尚未見報(bào)道。本研究旨在觀察缺氧/復(fù)氧模型上Cyr61、ERK1/2的表達(dá)及二者的關(guān)系，進(jìn)一步明確Cyr61在缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的可能機(jī)制。
　　方法：
　　通過傳代培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞株H9c2，建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型，分為缺氧/復(fù)氧組、缺氧預(yù)處理組、PD98059阻

3、斷組、對(duì)照組共四組，觀察缺氧預(yù)處理對(duì)于6小時(shí)、24小時(shí)后缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響，以MTT法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞活性;制備心肌細(xì)胞蛋白提取物，通過免疫熒光印跡法檢測(cè)缺氧/復(fù)氧時(shí)ERK1/2、Cyr61蛋白的表達(dá);通過加入ERK1/2上游激酶抑制劑PD98059，檢測(cè)阻斷ERK1/2后ERK1/2、Cyr61蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，6小時(shí)、24小時(shí)各組間心肌細(xì)胞活性比較，缺氧/復(fù)氧組（H/

4、R組）較對(duì)照組低;預(yù)處理組(HPC組)較H/R組高;PD98059組較HPC組低;每?jī)山M間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。通過Western blot檢測(cè)Cyr61與ERK1/2蛋白的表達(dá)結(jié)果，ERK1/2組灰度值比較，H/R組較對(duì)照組高出37％(n=6，p＜0.05)，HPC組較H/R組高出17％(n=6，p＜0.05);HPC+PD98059組較HPC組低48％(n=6，p＜0.05);Cyr61組灰度值比較，H/R組較對(duì)照組高