Cyr61在缺血預適應心肌保護中的作用及其機制.pdf

1、目的：
　　Cyr61是一種肝素綁定，富含半胱氨酸的分泌性多肽，是立早基因家族的重要一員。目前研究證實，Cyr61為一種新型的促血管生成因子，純化的Cyr61可以上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子mRNA和蛋白的表達，有利于缺血心肌組織中微血管的新生及側(cè)支循環(huán)的建立，減輕心肌缺血-再灌注損傷，對心肌細胞起保護作用。而Cyr61發(fā)揮心肌保護作用的具體作用機制尚不清楚。有研究表明，細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERKs)信號轉(zhuǎn)導途徑是促進細胞存活、抑制細胞凋

2、亡的重要細胞信號轉(zhuǎn)導途徑，并且介導缺血預適應的心臟保護功能，但是在缺血預適應減輕心肌細胞損傷中ERKs是否參與Cyr61的活化，尚未見報道。本研究旨在觀察缺氧/復氧模型上Cyr61、ERK1/2的表達及二者的關(guān)系，進一步明確Cyr61在缺氧/復氧誘導心肌細胞損傷中的保護作用及其信號轉(zhuǎn)導的可能機制。
　　方法：
　　通過傳代培養(yǎng)大鼠心肌細胞株H9c2，建立心肌細胞缺氧/復氧模型，分為缺氧/復氧組、缺氧預處理組、PD98059阻

3、斷組、對照組共四組，觀察缺氧預處理對于6小時、24小時后缺氧/復氧誘導心肌細胞損傷的影響，以MTT法檢測各組心肌細胞活性;制備心肌細胞蛋白提取物，通過免疫熒光印跡法檢測缺氧/復氧時ERK1/2、Cyr61蛋白的表達;通過加入ERK1/2上游激酶抑制劑PD98059，檢測阻斷ERK1/2后ERK1/2、Cyr61蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　通過MTT法檢測細胞存活率，6小時、24小時各組間心肌細胞活性比較，缺氧/復氧組（H/

4、R組）較對照組低;預處理組(HPC組)較H/R組高;PD98059組較HPC組低;每兩組間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。通過Western blot檢測Cyr61與ERK1/2蛋白的表達結(jié)果，ERK1/2組灰度值比較，H/R組較對照組高出37％(n=6，p＜0.05)，HPC組較H/R組高出17％(n=6，p＜0.05);HPC+PD98059組較HPC組低48％(n=6，p＜0.05);Cyr61組灰度值比較，H/R組較對照組高