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文檔簡介
1、目的: Wnt/β-catenin信號轉導通路異常激活可導致胚胎發(fā)育異常和腫瘤發(fā)生,如該通路的核心分子β-catenin異常表達與肝癌發(fā)生有關。Cyr61是一種細胞外基質相關蛋白,可發(fā)揮多種生理功能,包括介導細胞外基質的形成、細胞增殖、分化和黏附、促進細胞遷移和血管形成。近來Cyr61與腫瘤的關系日益受到關注,但與腫瘤發(fā)生的確切關系及機理至今不明。本研究首先檢測β-catenin與Cyr61在肝癌細胞株和肝癌病例組織中的表達,觀
2、察肝癌發(fā)生時,Cyr61表達與β-catenin表達的關系。進而以肝癌細胞株HepG2為模型,研究過表達外源性β-catenin和RNA干擾抑制內源性β-catenin表達時,對Cyr61表達調控。通過研究為探討肝癌發(fā)生中β-catenin是否調控了Cyr61表達,進一步揭示Cyr61在肝癌發(fā)生中的作用和機制奠定基礎,為腫瘤診斷與治療提供新的腫瘤標志物和基因治療靶點。 方法: 1.采用免疫組化SP染色法和RT-PCR檢測
3、人肝癌細胞株HepG2、QGY-7701、鼠肝癌細胞株H22和正常肝細胞株L02中β-catenin和Cyr61蛋白水平與mRNA水平的表達。 2.采用免疫組化SP染色法檢測62例肝細胞肝癌病人癌組織中β-catenin與Cyr61蛋白的表達,統(tǒng)計學方法分析二者與臨床病理參數(shù)之間的關系,并比較二者的相關性。 3.采用RT-PCR檢測30例肝細胞肝癌病人癌組織中β-catenin與Cyr61mRNA的表達水平,并比較二者的
4、相關性。 4.應用293細胞擴增重組腺病毒Adβ-catenin、AdGFP、Adsi-β-catenin,構建并擴增RNA干擾對照腺病毒AdSES-hus。 5.Adβ-catenin、AdGFP直接感染HepG2細胞,RT-PCR檢測感染后的1~3dβ-catenin和Cyr61的表達變化。 6.Adsi-β-catenin、AdSES-hus直接感染HepG2細胞,RT-PCR檢測感染后的2~4dβ-cat
5、enin和Cyr61的表達變化。 結果: 1.正常肝細胞株L02及肝癌細胞株HepG2、QGY-7701、H22q中β-catenin與Cyr61mRNA與蛋白均有表達,二者表達一致率達100%。 2.62例肝癌病例組織標本中,85.48%(53/62)β-catenin蛋白過表達,其過表達與靜脈浸潤、癌灶轉移、結節(jié)數(shù)的多少和AFP有關(P<0.05),而與腫塊大小、癌栓形成之間的關系無統(tǒng)計學意義。77.42%(
6、48/62)Cyr61蛋白過表達,其過表達與靜脈浸潤、癌灶轉移和結節(jié)數(shù)的多少有關(P<0.05),而與腫塊大小、癌栓形成和AFP的關系無統(tǒng)計學意義。β-catenin蛋白與Cyr61蛋白同時過表達的病例有72.58%(45/62),同時陰性表達的病例有10%(6/62),統(tǒng)計學分析顯示Cyr61蛋白與β-catenin蛋白表達呈正相關(r=0.435,P<0.05)3.30例肝癌病例組織標本中β-cateninmRNA和Cyr61mRN
7、A表達率均為100%,根據(jù)RT-PCR半定量結果進行統(tǒng)計學分析,β-cateninmRNA表達與Cyr61mRNA表達呈正相關(r=0.856,P<0.01)4.Adβ-catenin感染的HepG2細胞與AdGFP感染的HepG2細胞相比,β-catenin在感染24h后表達增強,Cyr61在感染后24h表達也隨之增強。 5.Adsi-β-catenin感染的HepG2細胞與AdSES-hus感染的HepG2細胞相比較,Ads
8、i-β-catenin在感染后48h明顯表達下調,Cyr61在48h也明顯表達下調。 結論: 1.β-catenin與Cyr61在肝癌細胞株和肝癌組織中表達高度一致,提示在肝癌中,Cyr61的過表達可能與β-catenin的過表達有關,二者過表達可能在肝癌的發(fā)生和侵襲轉移中起到重要作用。 2.在HepG2細胞中導入β-catenin基因過表達β-catenin后,與對照相比,上調了Cyr61的表達;而在導入si-
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