大鼠遠期缺血預適應現(xiàn)象的證實及其機制研究.pdf

1、目的：研究NF-κB及其調(diào)控的炎癥因子在腎臟遠期缺血預適應中的作用，結(jié)合血肌酐水平、腎組織病理學變化、腎小管損傷積分，從組織到分子水平初步探討遠期缺血預適應對于急性缺血性腎損傷是否具有保護作用及其可能的作用機制，為進一步研究遠期缺血預適應的保護作用機制以及臨床防治急性腎衰竭提供理論依據(jù)。 材料和方法：采用雙側(cè)腎蒂完全夾閉法制備大鼠腎臟遠期缺血預適應模型。大鼠隨機分成5組，每組6只：1.假手術組(sham組)；2.單純?nèi)毖俟嘧?

2、小時組(I/R6h)；3.單純?nèi)毖俟嘧?4小時組(I/R24h)；4.預適應.缺血再灌注6小時組(IPC/I-R6h)；5預適應-缺血再灌注24小時組(IPC/I-R24h)。Sham及2、3組大鼠只暴露雙側(cè)腎蒂，空置20分鐘后關閉腹腔；4、5組大鼠雙側(cè)腎蒂充分暴露后用動脈夾完全夾閉，20分鐘后松開，關閉腹腔。8天后，各組大鼠分別再次開腹，充分暴露雙側(cè)腎蒂，除Sham組外均用動脈夾完全夾閉腎蒂，40分鐘后松開并計算再灌注時間，6小時后

3、將2、4(I/R6h、IPC/I-R6h)組大鼠處死；24小時后將1(sham)、3(I/R24h)、5(IPC/I-R24h)組大鼠處死，所有大鼠處死前均采血和取腎組織。檢測血肌酐、評價腎組織病理學變化。用免疫組織化學方法檢測ICAM-1；用Realtime-PCR方法檢測腎組織ICAM-1、VCAM-1、ET-1、TNF-α、MIP-2 mRNA表達；用Western Blotting方法檢測腎組織COX-2、MCP-1蛋白水平表達

4、；用EMSA方法檢測腎組織NF-KB DNA結(jié)合活性及P50、P65二聚體亞單位組成。 結(jié)論：①成功地建立較為穩(wěn)定的遠期缺血預適應大鼠模型；②腎臟遠期缺血預適應使急性缺血后大鼠血肌酐上升幅度明顯減少，組織學損傷明顯減輕，小管損傷積分顯著減少，組織間粘附分子ICAM-1浸潤明顯減輕。提示遠期缺血預適應對。腎功能有一定的保護作用；③腎臟遠期缺血預適應在mRNA水平對ICAM-1、VCAM-1、MIP-2、ET-1、TNF-α等重要炎

5、癥因子的表達有明顯的抑制作用，在蛋白水平對COX-2、MCP-1有顯著抑制作用。遠期缺血預適應對腎臟的保護作用可能與諸多炎癥因子的表達受到的抑制有關。④NF-κB在遠期缺血預適應中起關鍵作用。IPC-I／R6h活化的NF-κ B顯著強于IPC-I／R24h，這可能與早期活化的NF-κ B P50／P50同二聚體亞單位對隨后24h的NF-κB的活化抑制有關。受抑制的NF-κ B通過基因調(diào)控，降低受控炎癥因子的mRNA及蛋白質(zhì)表達，從而減輕