大鼠遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)現(xiàn)象的證實(shí)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究NF-κB及其調(diào)控的炎癥因子在腎臟遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)中的作用，結(jié)合血肌酐水平、腎組織病理學(xué)變化、腎小管損傷積分，從組織到分子水平初步探討遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)于急性缺血性腎損傷是否具有保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用機(jī)制以及臨床防治急性腎衰竭提供理論依據(jù)。 材料和方法：采用雙側(cè)腎蒂完全夾閉法制備大鼠腎臟遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)模型。大鼠隨機(jī)分成5組，每組6只：1.假手術(shù)組(sham組)；2.單純?nèi)毖俟嘧?

2、小時(shí)組(I/R6h)；3.單純?nèi)毖俟嘧?4小時(shí)組(I/R24h)；4.預(yù)適應(yīng).缺血再灌注6小時(shí)組(IPC/I-R6h)；5預(yù)適應(yīng)-缺血再灌注24小時(shí)組(IPC/I-R24h)。Sham及2、3組大鼠只暴露雙側(cè)腎蒂，空置20分鐘后關(guān)閉腹腔；4、5組大鼠雙側(cè)腎蒂充分暴露后用動(dòng)脈夾完全夾閉，20分鐘后松開，關(guān)閉腹腔。8天后，各組大鼠分別再次開腹，充分暴露雙側(cè)腎蒂，除Sham組外均用動(dòng)脈夾完全夾閉腎蒂，40分鐘后松開并計(jì)算再灌注時(shí)間，6小時(shí)后

3、將2、4(I/R6h、IPC/I-R6h)組大鼠處死；24小時(shí)后將1(sham)、3(I/R24h)、5(IPC/I-R24h)組大鼠處死，所有大鼠處死前均采血和取腎組織。檢測(cè)血肌酐、評(píng)價(jià)腎組織病理學(xué)變化。用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ICAM-1；用Realtime-PCR方法檢測(cè)腎組織ICAM-1、VCAM-1、ET-1、TNF-α、MIP-2 mRNA表達(dá)；用Western Blotting方法檢測(cè)腎組織COX-2、MCP-1蛋白水平表達(dá)

4、；用EMSA方法檢測(cè)腎組織NF-KB DNA結(jié)合活性及P50、P65二聚體亞單位組成。 結(jié)論：①成功地建立較為穩(wěn)定的遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)大鼠模型；②腎臟遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)使急性缺血后大鼠血肌酐上升幅度明顯減少，組織學(xué)損傷明顯減輕，小管損傷積分顯著減少，組織間粘附分子ICAM-1浸潤(rùn)明顯減輕。提示遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)。腎功能有一定的保護(hù)作用；③腎臟遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)在mRNA水平對(duì)ICAM-1、VCAM-1、MIP-2、ET-1、TNF-α等重要炎

5、癥因子的表達(dá)有明顯的抑制作用，在蛋白水平對(duì)COX-2、MCP-1有顯著抑制作用。遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)對(duì)腎臟的保護(hù)作用可能與諸多炎癥因子的表達(dá)受到的抑制有關(guān)。④NF-κB在遠(yuǎn)期缺血預(yù)適應(yīng)中起關(guān)鍵作用。IPC-I／R6h活化的NF-κ B顯著強(qiáng)于IPC-I／R24h，這可能與早期活化的NF-κ B P50／P50同二聚體亞單位對(duì)隨后24h的NF-κB的活化抑制有關(guān)。受抑制的NF-κ B通過基因調(diào)控，降低受控炎癥因子的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)，從而減輕