Toll樣受體4在缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)對抗心肌缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、研究背景： Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)家族是最具代表的模式識別受體，是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分。大量研究證明TLRs參與了心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷、動脈粥樣硬化等心臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。其中Toll樣受體4(TLR4)是TLRs家族中重要的受體，不僅在免疫細(xì)胞表達，在心肌和內(nèi)皮細(xì)胞也有高表達。已證實TLR4主要通過MyD88依賴的NF-κB信

2、號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活免疫和炎癥反應(yīng)。近年研究也證明，TLR4基因缺陷小鼠遭受心肌I/R損傷后，梗死面積減小，炎癥也明顯減輕。提示，TLR4可能作為一個前致炎因子參與心肌I/R損傷的發(fā)生發(fā)展。預(yù)適應(yīng)是減輕心肌I/R損傷的重要方法，包括缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)等。缺血預(yù)適應(yīng)(Ischemic preconditioning，IPC)是指心肌遭受短暫缺血后能耐受隨后嚴(yán)重的缺血損傷的現(xiàn)象。IPC可減少心肌I/R損傷，但機制復(fù)雜，可能涉及多種膜受體、信號

3、分子和許多內(nèi)源性的保護性蛋白的表達。目前IPC作為一種有效的、預(yù)防性的對抗心肌UR損傷的治療方法，由于技術(shù)和倫理的原因，其臨床應(yīng)用受到限制，從而提出了藥物預(yù)適應(yīng)的概念。中藥吳茱萸的主要藥理活性成分吳茱萸次堿能對抗心肌缺血再灌注損傷，其心臟保護作用與激活辣椒素受體(VR1)促進內(nèi)源性降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)合成與釋放有關(guān)。CGRP是一重要的辣椒素敏感神經(jīng)遞質(zhì)，是一種重要的

4、內(nèi)源性心肌保護物質(zhì)。國內(nèi)外均證實CGRP在預(yù)適應(yīng)心臟保護中起重要作用。此外，CGRP也可抑制免疫細(xì)胞的激活。 本實驗研究目的是觀察缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)是否通過降低TLR4的表達以對抗心肌I/R損傷。此保護作用是否與促進CGRP釋放有關(guān)。 方法： SD大鼠在I/R前進行缺血預(yù)適應(yīng)或給予吳茱萸次堿(100，300μg/kg，I/R前10 min靜脈注射)和Capsazepine(1.5 mg/kg，給吳茱萸次堿前2

5、 min靜脈注射)，然后結(jié)扎左冠狀動脈前降支缺血60min，再灌注3 h。RT-PCR分析TLR4 mRNA的表達水平。免疫組織化學(xué)方法分析TLR4和NF-κB的蛋白表達水平。心肌染色法測量心肌梗死面積。放射免疫法測定血漿中CGRP的濃度。分光光度法法測定血清中肌酸激酶的活性。 結(jié)果： 預(yù)先進行缺血預(yù)適應(yīng)或給予吳茱萸次堿的大鼠TLR4 mRNA表達水平比缺血再灌注損傷組顯著降低(P＜0.05)；相應(yīng)缺血預(yù)適應(yīng)組和吳茱萸次

6、堿預(yù)處理組大鼠TLR4和NF-κB的蛋白表達也比缺血再灌注損傷組顯著減少(P＜0.05)。同時發(fā)現(xiàn)，缺血預(yù)適應(yīng)和吳茱萸次堿能顯著增加血漿CGRP濃度、降低心肌梗死面積和血清肌酸激酶活性。吳茱萸次堿的上述作用可被預(yù)先給予選擇性辣椒素受體拮抗劑Capsazepine所取消。Capsazepme和溶媒本身對TLR4和NF-κB的表達無影響。 結(jié)論： 缺血預(yù)適應(yīng)和吳茱萸次堿可能通過降低心肌TLR4和NF-κB的表達對抗心肌缺血再