Toll樣受體4在缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、研究背景： Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)家族是最具代表的模式識(shí)別受體，是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分。大量研究證明TLRs參與了心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷、動(dòng)脈粥樣硬化等心臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。其中Toll樣受體4(TLR4)是TLRs家族中重要的受體，不僅在免疫細(xì)胞表達(dá)，在心肌和內(nèi)皮細(xì)胞也有高表達(dá)。已證實(shí)TLR4主要通過(guò)MyD88依賴(lài)的NF-κB信

2、號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活免疫和炎癥反應(yīng)。近年研究也證明，TLR4基因缺陷小鼠遭受心肌I/R損傷后，梗死面積減小，炎癥也明顯減輕。提示，TLR4可能作為一個(gè)前致炎因子參與心肌I/R損傷的發(fā)生發(fā)展。預(yù)適應(yīng)是減輕心肌I/R損傷的重要方法，包括缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)等。缺血預(yù)適應(yīng)(Ischemic preconditioning，IPC)是指心肌遭受短暫缺血后能耐受隨后嚴(yán)重的缺血損傷的現(xiàn)象。IPC可減少心肌I/R損傷，但機(jī)制復(fù)雜，可能涉及多種膜受體、信號(hào)

3、分子和許多內(nèi)源性的保護(hù)性蛋白的表達(dá)。目前IPC作為一種有效的、預(yù)防性的對(duì)抗心肌UR損傷的治療方法，由于技術(shù)和倫理的原因，其臨床應(yīng)用受到限制，從而提出了藥物預(yù)適應(yīng)的概念。中藥吳茱萸的主要藥理活性成分吳茱萸次堿能對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷，其心臟保護(hù)作用與激活辣椒素受體(VR1)促進(jìn)內(nèi)源性降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)合成與釋放有關(guān)。CGRP是一重要的辣椒素敏感神經(jīng)遞質(zhì)，是一種重要的

4、內(nèi)源性心肌保護(hù)物質(zhì)。國(guó)內(nèi)外均證實(shí)CGRP在預(yù)適應(yīng)心臟保護(hù)中起重要作用。此外，CGRP也可抑制免疫細(xì)胞的激活。 本實(shí)驗(yàn)研究目的是觀察缺血預(yù)適應(yīng)和藥物預(yù)適應(yīng)是否通過(guò)降低TLR4的表達(dá)以對(duì)抗心肌I/R損傷。此保護(hù)作用是否與促進(jìn)CGRP釋放有關(guān)。 方法： SD大鼠在I/R前進(jìn)行缺血預(yù)適應(yīng)或給予吳茱萸次堿(100，300μg/kg，I/R前10 min靜脈注射)和Capsazepine(1.5 mg/kg，給吳茱萸次堿前2

5、 min靜脈注射)，然后結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支缺血60min，再灌注3 h。RT-PCR分析TLR4 mRNA的表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)方法分析TLR4和NF-κB的蛋白表達(dá)水平。心肌染色法測(cè)量心肌梗死面積。放射免疫法測(cè)定血漿中CGRP的濃度。分光光度法法測(cè)定血清中肌酸激酶的活性。 結(jié)果： 預(yù)先進(jìn)行缺血預(yù)適應(yīng)或給予吳茱萸次堿的大鼠TLR4 mRNA表達(dá)水平比缺血再灌注損傷組顯著降低(P＜0.05)；相應(yīng)缺血預(yù)適應(yīng)組和吳茱萸次

6、堿預(yù)處理組大鼠TLR4和NF-κB的蛋白表達(dá)也比缺血再灌注損傷組顯著減少(P＜0.05)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，缺血預(yù)適應(yīng)和吳茱萸次堿能顯著增加血漿CGRP濃度、降低心肌梗死面積和血清肌酸激酶活性。吳茱萸次堿的上述作用可被預(yù)先給予選擇性辣椒素受體拮抗劑Capsazepine所取消。Capsazepme和溶媒本身對(duì)TLR4和NF-κB的表達(dá)無(wú)影響。 結(jié)論： 缺血預(yù)適應(yīng)和吳茱萸次堿可能通過(guò)降低心肌TLR4和NF-κB的表達(dá)對(duì)抗心肌缺血再