α-細(xì)辛醚對人食管癌細(xì)胞系Eca-109增殖抑制作用及機制研究.pdf

1、目的:運用現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗技術(shù)，探討α-細(xì)辛醚抗食管癌作用靶點及機制，為臨床運用中藥治療食管癌提供必要的實驗依據(jù)，同時也為臨床治療食管癌增添一種高效、低毒、價廉的中藥制劑。
　　方法:
　　1．用不同劑量的α-細(xì)辛醚注射液，依次作用在人食管癌細(xì)胞株上，四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）測定Eca-109細(xì)胞的增殖抑制率；通過計算細(xì)胞增殖抑制率、繪制增殖抑制曲線等，綜合分析α-細(xì)辛醚對人食管癌細(xì)胞系 Eca-109細(xì)胞增殖活性的影

2、響。
　　2．應(yīng)用普通倒置顯微鏡和倒置熒光顯微鏡技術(shù)，觀察α-細(xì)辛醚作用于人食管癌細(xì)胞系Eca-109后，細(xì)胞生長狀況及形態(tài)學(xué)變化。
　　3．運用流式細(xì)胞術(shù)，檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率，探討α-細(xì)辛醚對人食管癌細(xì)胞系Eca-109的增殖抑制的作用及機制。
　　4．采用蛋白免疫印跡技術(shù)及熒光定量PCR技術(shù)對細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)蛋白（Caspase-3、Caspase-9、CyclinD1和CDK4）的表達(dá)水平進(jìn)行分析，探討α-細(xì)辛

3、醚對人食管癌細(xì)胞株Eca-109的作用機制及與基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1．α-細(xì)辛醚作用在人食管癌細(xì)胞系 Eca-109顯示有明顯的抑制細(xì)胞生長的作用，與陰性對照組的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；計算表明量效關(guān)系明顯，回歸方程為：Y=0.5376X+4.022，其中，R2=0.993，P=0.000﹤0.05。
　　2．α-細(xì)辛醚處理后，可見細(xì)胞典型的凋亡改變，細(xì)胞縮小、核膜有的厚薄不均或者呈半月形狀，另外可見

4、部分細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞。
　　3．1)α-細(xì)辛醚作用24小時后，G0/G1期的細(xì)胞數(shù)顯著升高，跟陰性對照組的比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；S期的細(xì)胞數(shù)明顯下降，與陰性對照組的比較，差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義。2)凋亡指數(shù)和陰性對照組的相比，與劑量的增加成正比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4．蛋白免疫印跡方法和熒光定量 PCR法檢測α-細(xì)辛醚作用后細(xì)胞內(nèi) CyclinD1、CDK4表達(dá)量明顯減少，Caspase-3、Caspase-9表達(dá)量顯著

5、增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1．α-細(xì)辛醚作用于人食管癌細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的抑制作用，且其作用是劑量和時間相關(guān)性的。
　　2．α-細(xì)辛醚作用在人食管癌細(xì)胞上對其的增殖有顯著的抑制效應(yīng)，主要表現(xiàn)在兩個方面：促凋亡和抑增殖的作用。
　　3．α-細(xì)辛醚抑制人食管癌細(xì)胞系Eca-109增殖的主要作用機理可能與阻滯細(xì)胞的周期在 G0/G1期，以及在細(xì)胞周期 G1→S期檢測點的調(diào)控因子 CyclinD1和CDK4的