切口牽拉痛的亞細胞特征性改變及超前局部浸潤阻滯對其的影響.pdf

1、目的和意義:
　　本研究將會圍繞此成功建立的術(shù)后持續(xù)性疼痛模型，展開一系列的研究并與臨床常用麻醉與鎮(zhèn)痛方法緊密結(jié)合，探討不同的用藥配伍方案與術(shù)后持續(xù)性疼痛的程度的相關(guān)性和安全性，為臨床的麻醉與鎮(zhèn)痛方案制定提供基礎理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　第一部分
　　研究方法:實驗選用雄性SD大鼠32只，隨機分成2組(n=16)，S組(SMIR組)和C組（對照組/單純切皮并牽拉組），2組分別進行SMIR切口牽拉手術(shù)和單純

2、切皮并牽拉術(shù)。成功建立模型后，所有大鼠分別進行行為學測試(Von Frey機械痛測試，熱痛測試)，分別在第3天和第28天對2組大鼠進行取材，取隱神經(jīng)、L34背根神經(jīng)節(jié)，分別進行尼氏染色光鏡下觀察、電鏡觀察和免疫熒光觀察（OX-42和GFAP陽性）細胞的活性。
　　第二部分
　　研究方法:SD大鼠(n=64)(180-220g)在腹腔注射10％的水合氯醛(100mg/ml)400 mg/kg，隨機分為4組，S組(SMIRsur

3、gery group)，R組(Ropivocaine group)，RD1組(Ropivocaine復合1微克DEX)和RD5組(Ropivocaine復合1微克DEX)。SMIR模型被選擇為第二部分的研究模型，行為學測試進行至建立模型后第14天，在術(shù)后第3天每組的8只大鼠用于取材，隱神經(jīng)和背根神經(jīng)節(jié)在光鏡和電子顯微鏡下進行分析。
　　第三部分
　　研究方法:48只SD大鼠(180-220g)被隨機納入本研究的3組中。S組(

4、n=16):在SMIR手術(shù)操作前，隱神經(jīng)周圍注射0.9％生理鹽水，8只大鼠被應用于行為學測試，余下8只大鼠分別在術(shù)后第3天和術(shù)后第28天取材并進一步分析;R組(n=16):在SMIR手術(shù)操作前，隱神經(jīng)周圍注射單純0.5％羅哌卡因，8只大鼠被應用于行為學測試，余下8只大鼠分別在術(shù)后第3天和術(shù)后第28天取材并進一步分析;RD1組(n=16):在SMIR手術(shù)操作前，隱神經(jīng)周圍注射單純0.5％羅哌卡因復合DEX微克，8只大鼠被應用于行為學測試，

5、余下8只大鼠分別在術(shù)后第3天和術(shù)后第28天取材并進一步分析。取材后的大鼠DRG應用于免疫熒光和高倍電鏡的觀察。
　　統(tǒng)計學處理
　　定量資料以均數(shù)加減標準誤/差的方式表達，定量資料組間選擇單因素方差分析進行統(tǒng)計學分，組內(nèi)（不同測量天數(shù)）的定量資料選擇重復測量方差分析，兩組數(shù)據(jù)的比較選擇獨立樣本的t檢驗;定性資料以卡方檢驗進行統(tǒng)計學分析。P＜0.05有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果:
　　第一部分
　　術(shù)后第1至5天

6、，S組機械痛程度達到峰值，C組機械痛達峰時點僅在第3天;C組在第5天基本恢復至正常值，S組在第21天后基本恢復正常與C組無統(tǒng)計學差異;同側(cè)熱痛(R)閾值第1天兩組增高，C組在第3天恢復正常，第5天至第21天表現(xiàn)出相對組S更高的熱痛閾值，S組熱痛閾值稍高于基礎值，21天后兩組同側(cè)后足對熱刺激均無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。S組和C組對側(cè)(L)術(shù)后均表現(xiàn)出機械痛，均在第3天達到峰值，C組除外第3天，其余時點機械痛閾值與基礎值比較無差異，而S

7、組機械痛閾值均比較C組低(p＜0.05)。S組熱痛也表現(xiàn)增高的趨勢，術(shù)后第1天和術(shù)后第14天高于C組，其余時點，兩組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。術(shù)后第3-5天，兩組均首次表現(xiàn)出對熱痛的敏感，S組閾值低于C組，第7天后（除外第14天），兩組差異不顯著(P＞0.05)。尼氏染色并未顯示隱神經(jīng)具有水腫和變性。應用軟件Gel-Pro Analyser進行灰度面積統(tǒng)計，雙側(cè)的急性期灰度值分別是(9110.45±135.21)和(8900.54±

8、200.21)，有統(tǒng)計學差異，P＜0.05。慢性期灰度面積分別為(9210.45±155.56)和(9000.54±312.38)組間比較，無統(tǒng)計學差異，P＞0.05。電子顯微鏡下(8000X)觀測到的隱神經(jīng)的形態(tài)學計數(shù)資料顯示有髓軸突和C纖維密度并沒有因為牽拉而發(fā)生改變。有髓軸突的密度和C纖維的密度，S組在各時點與C組比較，組間沒有差異，P＞0.05（t檢驗）。慢性期和急性期S組橢圓形微管密度在神經(jīng)牽拉后在有髓軸突內(nèi)和C纖維內(nèi)增加，比

9、較C組明顯增加（P＜0.05），而2組中圓形微管則無顯著性差異（P＞0.05）。含有異常線粒體的有髓軸突的比例在急性期S組高于C組（對照組），在慢性期異常線粒體的比例仍然比較對照組增高，但是C纖維中的線粒體的增加組間比較具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。神經(jīng)元內(nèi)異常線粒體的數(shù)量（no./視野）分別在0天、術(shù)后3天和術(shù)后28天取材后進行觀察，術(shù)后3天和術(shù)后28天，異常線粒體數(shù)目S組明顯高于組C，組間比較，P＜0.05。異常線粒體數(shù)目與溶酶體

10、數(shù)目的表現(xiàn)基本一致。S組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在神經(jīng)牽拉后的第3天，表現(xiàn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)水腫樣的間隙增大增寬，第28天，水腫樣改變并沒有改善。C組并未明顯見到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的間隙增大增寬的病理性改變。施萬細胞(schwann，又名雪旺細胞)和衛(wèi)星細胞(GFAP)在急性期的活化比例增多，慢性期減少，且免疫熒光顯示急性期表達比例高，慢性期表達量少。小膠質(zhì)細胞的標記物（OX-42），小膠質(zhì)細胞在神經(jīng)被牽拉后的同側(cè)急性期大量活化，慢性期第28天活化程度大幅回落。
　　第

11、二部分
　　我們研究數(shù)據(jù)證實外周神經(jīng)周圍給予右美托咪定復合羅哌卡因，能明顯改善SMIR模型急性期的機械痛且疼痛的達峰時間延遲。復合劑量的用藥組熱痛的閾值升高。而且異常線粒體的數(shù)量在低劑量DEX復合羅哌卡因組(1μg復合0.5％右美托咪定)明顯低于其他3組。
　　第三部分
　　本研究結(jié)果提示S組、R組和RD1組同側(cè)機械痛的閾值在第3天從基礎值各自下降至4.52±0.667 g，5.827±0.732g，11.88±0.2

12、23g，對側(cè)后足各組的機械痛閾值從基礎值下降至7.10±0.91g，17.687±1.9g，16.213±1.8g。免疫熒光結(jié)果顯示第3天，3組膠質(zhì)細胞的激活雙側(cè)均出現(xiàn)，第28天膠質(zhì)細胞活性均下降。組間比較，R組和S組的同側(cè)膠質(zhì)細胞活性最強，以表達OX-42抗體陽性細胞為主，GFAP陽性細胞的活性相對弱。高倍電鏡的觀測結(jié)果顯示，腫脹和空泡樣變的線粒體和溶酶體的數(shù)目在S組和R組的同側(cè)明顯多于對側(cè)，但在RD1組，可見腫脹和空泡樣變的線粒體和

13、溶酶體的數(shù)目明顯減少。
　　結(jié)論:
　　第一部分
　　結(jié)論本次研究所探討的外周神經(jīng)牽拉后，其損傷效應是多因素參與的結(jié)果。外周神經(jīng)被牽拉，線粒體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在應激狀態(tài)下分別表現(xiàn)為水腫樣和空泡樣改變，微管在線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的變化刺激下傾斜率增加，伴隨小膠質(zhì)細胞、衛(wèi)細胞和施萬細胞相繼被活化。隨著疼痛癥狀的減輕，上述的病理改變也相應改善。異常線粒體與疼痛的關(guān)系可能與軸突受損傷后密切相關(guān)。因此疼痛的癥狀和線粒體的改變可能是神經(jīng)受刺激后的