慢性粒細胞白血病骨髓間質干細胞活性改變及三氧化二砷對其影響.pdf

1、目的：比較慢性粒細胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者與健康人骨髓間質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)體外生長活性及SCF、integrin-β1基因表達水平，探討B(tài)MMSCs活性變化與CML發(fā)病的關系；研究不同濃度ATO對CML患者BMMSCs生長活性及SCF、integrin-β1基因表達水平的影響，探討ATO體外對骨髓造血微環(huán)境的影響。

2、為進一步闡明CML發(fā)病機制、探索CML新的臨床治療靶點提供理論和實驗基礎。 方法：1、CML慢性期患者BMMSCs為實驗組，健康人BMMSCs為對照組。原代培養(yǎng)BMMSCs三天后倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀況，比較兩組細胞形態(tài)及生長特性并在傳代培養(yǎng)第1至11天對細胞進行計數(shù)，繪制兩組細胞生長曲線；2、提取第4代細胞總RNA，Real-Time PCR法測定兩組細胞SCF、integrin-β1 mRNA表達水平并進行分析比較；3、

3、CML患者BMMSCs傳代后培養(yǎng)體系中加入ATO，終濃度為Omol/L、1 μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L，共培養(yǎng)72h觀察ATO對BMMSCs貼壁及生長的影響：4、96孔板培養(yǎng)第4代CML患者BMMSCs 24小時后培養(yǎng)體系中加入終濃度分別為Oμmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/LATO，繼續(xù)培養(yǎng)48h后MTT法測定ATO對BMMSCs生長抑制率；5、第4代CML患者BMMSCs培養(yǎng)24小時

4、后培養(yǎng)體系中加入ATO，終濃度分別為0moL/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L，繼續(xù)培養(yǎng)48h后終止培養(yǎng)，提取總RNA，Real-Time PCR法測定BMMSCs表達SCF、integrin-β1 mRNA水平,并進行統(tǒng)計學分析比較。 結果：1、實驗組及對照組BMMSCs形態(tài)均以長梭形為主，呈貼壁生長，兩組BMMSCs基本生長特性如傳代周期及生長曲線無明顯差異；2、實驗組BMMSCs表達SCF、integr

5、in-β1基因較健康對照組高(P＜0.05)。3、ATO影響CML患者BMMSCs貼壁及生長，隨ATO濃度增大細胞貼壁越差，5μmol/L組72h后細胞大多懸浮并死亡。4、ATO明顯抑制BMMSCs的生長，隨ATO濃度升高抑制率上升(P＜0.05)；5、ATO對CML患者BMMSCs表達SCF和integrin-β1基因水平有影響。1μmol/L濃度組SCF基因表達水平較空白對照組升高但無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；2.5μmol/L濃

6、度組SCF基因表達水平較空白對照組顯著升高(p＜0.01)，較1μmol/L、5μmol/L濃度組也高(p＜0.01)；5μmol/L組SCF基因表達水平顯著下降并較空白對照組低但無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。BMMSCs表達integrin-β1基因水平在1μmol/L組較空白照組顯著升高(p＜0.01)；隨著ATO濃度增大，BMMSCs表達integrin-β1基因水平出現(xiàn)下降，5μmol/L組表達水平較1μmol/L組integr

7、in-β1基因水平顯著降低(p＜0.01)。 結論：1、CML患者BMMSCs細胞形態(tài)及細胞活性與健康人無明顯差異。2、CML患者BMMSCs異常高表達SCF，對CML白血病細胞有直接促增殖、分化作用，與CML疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關。integrin-β1高表達促進細胞周期，參與調節(jié)細胞增殖，并可以使腫瘤細胞凋亡減少,對CML疾病發(fā)生發(fā)展有一定的促進作用。3、體外ATO能顯著影響B(tài)MMSCs貼壁，抑制其生長活性并誘導BMMSCs