中醫(yī)脾虛證型與老年黃斑變性疾病相關(guān)性的實驗研究.pdf

1、目的:通過對老年黃斑變性(AMD)模型小鼠進行中醫(yī)脾虛證型造模，建立AMD與脾虛證型病證結(jié)合的動物模型，并觀察中醫(yī)脾虛證型與AMD之間的相關(guān)性。
　　方法:選取20只2月齡C57BL為背景的ApoE基因缺失(ApoE-/-)小鼠，隨機分為2月齡ApoE-/-單純模型對照組組和2月齡ApoE-/-脾虛模型組，每組10只;另外選取10只2月齡C57BL作為空白對照組。脾虛模型組造模采用飲食失節(jié)法創(chuàng)建，自然環(huán)境中高脂飼料喂養(yǎng)，自由進食、

2、飲水;空白對照組與單純模型對照組常規(guī)飲食及自然環(huán)境，自由進食、飲水;喂養(yǎng)4個月后，斷頭處死并取血，收集眼球;檢測血低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)與總膽固醇(TC)的表達(dá);通過免疫組織化學(xué)方法檢測各組小鼠視網(wǎng)膜重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá);Western blot方法檢測每一組小鼠眼球視網(wǎng)膜VEGF的表達(dá);光鏡觀察小鼠視網(wǎng)膜組織病理性改變;電鏡觀察小鼠視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)的病理性改變。
　

3、　結(jié)果:脾虛模型組與單純模型對照組小鼠體重明顯高于空白對照組(P＜0.05)，而脾虛模型組與單純模型對照組體重差異不顯著;脾虛模型組血TC、LDL-C指標(biāo)明顯高于空白對照組及單純模型對照組(P＜0.05)，單純模型對照組與空白對照組血TC、LDL-C差異不明顯;免疫組織化學(xué)半定量檢測視網(wǎng)膜VEGF及bFGF結(jié)果顯示，脾虛模型組VEGF明顯高于空白對照組(P＜0.05)，其余組之間的VEGF差異不明顯，脾虛模型組bFGF明顯高于單純模型對

4、照組與空白對照組(P＜0.05)，單純模型對照組與空白對照組之間的bFGF差異不明顯;Western-blot檢測視網(wǎng)膜VEGF蛋白量結(jié)果顯示，單純模型對照組與脾虛模型組明顯高于空白對照組(P＜0.05)，脾虛模型組明顯高于單純模型對照組(P＜0.05);各組小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，單純模型對照組與脾虛模型組小鼠均出現(xiàn)了RPE細(xì)胞基底膜皺褶減少，微絨毛稀疏，其間黑色素顆粒減少，線粒體腫脹，Bruch膜結(jié)構(gòu)粗細(xì)不均勻，彈力層斷裂等類

5、似AMD樣病理改變，且脾虛模型組改變較單純模型對照組更為明顯。
　　結(jié)論:對ApoE-/-小鼠進行高脂飲食喂養(yǎng)成功建立了干性AMD模型，可作為實驗研究AMD的優(yōu)勢模型;通過高脂飲食喂養(yǎng)成功建立了中醫(yī)脾虛證型的動物模型;高脂飲食喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)了一系列早期AMD的病理表現(xiàn)及脾虛證候表現(xiàn)，證明實驗成功將中醫(yī)脾虛證型與AMD疾病相結(jié)合，建立病證結(jié)合的中醫(yī)AMD模型;脾虛模型組較單純模型組更顯著的AMD病理改變說明了中醫(yī)脾