紫外線誘導家蠶卵巢細胞（BmN—SWU1）凋亡的研究.pdf

1、目前華中師大實驗小組已經證明，在紫外線照射或桿狀病毒誘導的昆蟲細胞凋亡中，cytc從線粒體釋放到細胞質中,提示了與哺乳動物細胞的凋亡相同，這表明線粒體在昆蟲細胞凋亡中也具有重要作用。作為生物學、遺傳學和發(fā)育生物學模式昆蟲之一的家蠶，其細胞凋亡研究尚處于初始階段,是否存在線粒體途徑仍然未知。本研究以家蠶卵巢細胞BmN-SWU1細胞為實驗材料，對紫外線誘導的細胞凋亡進行了初步的研究，獲得了以下研究結果。 1 Bmcytc基因克隆與信

2、息分析本實驗成功克隆了家蠶Bmcytc基因，cDNA長為570bp，ORF長324bp(ORF：84-407)，編碼108個氨基酸殘基，預測分子量為11.7 kD。通過結構域預測，編碼蛋白含有一個典型的cytc結構域。通過多序列比對顯示，與NCBI登錄的人、大鼠和果蠅(cytc-d和cytc-p)的蛋白序列相似性分別為75％，83％，75％和88％?；鶎M序列分析結果顯示Bmcytc基因具有4個外顯子，外顯子/內含子邊界處均符合GT-A

3、G規(guī)則。參與凋亡時與凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)相互作用的關鍵位點在家蠶細胞色素C中是基本保守的。 2 UVC誘導家蠶BmN-SWU1細胞凋亡UVC處理家蠶BmN-SWU1細胞后，可誘導BmN-SWU1細胞產生典型細胞凋亡。光鏡下可見細胞膜表面突出或形成小泡，細胞破裂成凋亡小體。UVC處理24h后，細胞幾乎全部破裂成凋亡小體。Hoechest33258染色顯示感染細胞核逐漸形交，直至破裂成小塊而被凋亡小體包裹。BmN-SW

4、U1細胞處理后DNA瓊脂糖凝膠電泳成典型凋亡細胞DNA梯形電泳譜帶。 3 UVC誘導家蠶BmN-SWU1細胞凋亡時細胞內線粒體變化流式細胞儀對線粒體膜電位進行檢測,結果表明,細胞經羅丹明(Rho-123)染色后在流式細胞儀上檢測，UVC處理后12h的BmN-SWU1細胞中，膜電位下降的細胞明顯增多，熒光峰左移，即朝熒光強度減少的方向移動，說明此時膜電位下降。Western Blotting檢測蛋白cytc在細胞質和線粒體中的含量