紫外線誘導人角質形成細胞產生炎癥因子及其機理研究.pdf

1、背景：紫外線輻射(UltravioletRadiation，UVR)可引起皮膚炎癥反應。人體皮膚的主要組成細胞—人角質形成細胞(HumanKeratinocytes，HKC)可接受各種外界刺激，激活胞內復雜的信號傳遞機制，合成多種細胞因子。UVR可誘導HKC表達包括IL-8在內的多種炎癥細胞因子，但其誘導皮膚炎癥的機理，特別是炎癥信號涉及的受體分子及信號傳導途徑，尚缺少明確的實驗依據。目的：觀察中波紫外線(UltravioletB，UV

2、B)對HKCIL-8表達的影響，并初步探討其細胞信號傳導的通路和機制。 方法：1.人角質形成細胞株HaCaT以不同強度UVB(10～80mJ/cm2)照射，培養(yǎng)24h后ELISA法檢測上清液中IL-8的濃度。2.用相同強度UVB(30mJ/cm2)照射HKC后1h、3h、6h、12h、24h收集細胞培養(yǎng)上清，檢測IL-8的濃度。3.UVB(40mJ/cm2)照射HKC，分別于照射后0h、0.5h、1h、2h、4h時收集細胞胞漿蛋

3、白和核蛋白，Westernblotting法檢測NF-κB信號傳導通路中的重要分子IκB-α、磷酸化IκB-α和NF-κBp65蛋白的動態(tài)變化，以及MAPK家族的蛋白分子ERK1/2、p38、c-JNK等磷酸化激活的動態(tài)變化。4.用重組腺病毒將MyD88突變體轉入HKC，UVB照射后24h檢測HKC產生IL-8的水平。5.HKC用40mJ/cm2的UVB照射后，加入0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml蘆薈多糖，培養(yǎng)24h后收集上

4、清，檢測IL-8濃度。 結果：1.UVB照射可使HKC分泌IL-8增加，其濃度隨UVB的照射量(由10mJ/cm2增加到40mJ/cm2)呈強度依賴性。當UVB為40mJ/cm2時，IL-8濃度達到最高水平。2.30mJ/cm2強度的UVB照射后，細胞分泌IL-8的量1h后就開始增加，12h時達到高峰。3.Westernblotting檢測示UVB照射后0.5h時IκB-α就開始發(fā)生磷酸化和降解，在第2h、4h時更加明顯；細胞核

5、蛋白P65的量在照射后0.5h開始升高，在隨后的2h時達到高峰。UVB照射后10minHKC內的ERK1/2、p38、c-JNK蛋白的磷酸化就開始增加。4.重組腺病毒將MyD88突變體轉染HKC后，降低了UVB誘導的IL-8表達。5.蘆薈多糖可明顯減少UVB照射HKC所致IL-8增加，該差異有顯著性(p＜0.05)，而不同濃度的蘆薈多糖(10μg/ml和50μg/ml)間相比無顯著性差異(p＞0.05)。 結論：1.UVB可顯著